氯化镧对组织工程骨成骨作用的影响-临床口腔医学专业毕业论文.docx

博士学位论文题 博士学位论文 题 目 氯化镧对组织工程骨成骨作用的影响 作者姓名 王小平 学科(专业) 临床口腔医学 指导教师姓名 周营同教授 学下 号’ 102 135 论文提交日期 2006年4月l 6日 上海市自然科学基金资助项目，编号04ZRl4139 题 题 目 氯化镧对组织工程骨成骨作用的影响 作者姓名 王小平 学科(专业) 临床口腔医学 ’-—-—JL J‘ I‘·一--_一上-J一·JL- 饼艽万I口】 柿土与口Ji{至恢；丙 申请学位 博士 指导教师姓名 周曾同教授 培养单位^嗣 ’rI 早 l二L 上海交通大学上；母父遗大莩 肖三三丁 1 07 1 3 S -了 基金项目；=支m上W d 上海市自然科学基金资助 项目编号04ZRl4139 关键词 氯化镧，骨髓基质干细胞， 脱钙冻干骨，组织工程骨 论文提交日期 2006年4月1 6日 for for The Doctor’S Degree of Stomatology INFLUENCE OF LANTHANUM CHLORIDE ON THE OSTEOGENESIS OF TISSUE ENGINEERING BONE School／Department：Colledge of Medicine Discipl ine Stomatology Major Oral Medicine Candidate Wang Xiao．ping ^ supervisor Zhou Zeng—tong，Professor Submitting Date April 1 6，2006 Suppported by Shahghai Natural Science Fund， Project Number：04ZRl4139 上海交通大学学位论文原创性声明 上海交通大学 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下， 独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本 论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本 文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。 本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 靴敝储戳矗小平蛳 日期： 2006年4月16日 4 上海交通大学学位论文版权使用授权书 上海交通大学 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定， 同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版， 允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的 全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫 描等复制手段保存和汇编本学位论文。 保密口，在土年解密后适用本授权书。 本学位论文属于 不保密口。 (请在以上方框内打“4”) 学位论文作者签名：王小平 指导教师签名：2 日期： 2006年4月16日 日期： 年 月 日 氯化镧对组织工程骨成骨作用的影响摘要 氯化镧对组织工程骨成骨作用的影响 摘要 目的 观察氯化镧对成骨条件诱导培养的实验犬骨髓基质干细胞 (BMSCs)增殖与分化的影响。将氯化镧干预后的BMSCs与猪的冻 干脱钙骨(fdDBM)复合培养后回植入裸鼠皮下或实验犬自体颌骨人 造骨缺损处，观察氯化镧对这种组织工程骨成骨的影响。 材料与方法 1选实验犬12只，通过密度梯度离心法从犬骨髓中分离出 BMSCs，体外培养并向成骨细胞诱导分化。以5．564×102 la g，ml、5．564 u g／IId、5．564X 10七la∥ml三种浓度的氯化镧(La3+)干预第三代 BMSCs，设空白对照组和50nJml BMP．2阳性对照组。通过MTT法 与ALP半定量检测分析La3+对BMSCs增殖和分化的影响。用组织学、 免疫组织化学、透射电镜(TEM)、电子探针波谱(EMWS)及高分 辨透射电镜能谱(HRTEM)诸方法观察BMSCs受La3+作用后细胞形 态与结构的变化。 2将上述三种浓度La3+干预组、空白对照组和阳性对照组的 BMSCs与猪脱钙冻干骨(fdDBM)复合，体外培养一周后植入裸鼠 皮下或实验犬(仅以5．564u Jrra的氯化镧干预)颌骨人造骨缺损处。 8周(鼠)、3月及6月(犬)后取植入物或颌骨标本并加工处理，通 过组织学、免疫组织化学、X线灰度(骨密度)及标本钙磷含量分析， 了解不同浓度La3+对BMSCs成骨能力的影响。 结果 1、相差倒置显微镜下观察发现BMSCs经诱导分化培养后形态 与诱导前无明显差异。MTT法检测显示经诱导分化后的细胞增殖能 力有所下降。诱导后BMSCs ALP染色呈棕红色阳性结果、Vonkossa 染色可见矿化结节，表明经诱导培养后BMSCs确已成为成骨细胞。 2、ALP半定