慢病毒介导RNAi沉默Id1对肠癌HCT116细胞干细胞相关特性和侵袭转移的影响-内科学(血液)专业毕业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 目 录 英文缩略词表1 中文摘要 2 Abstract 5 第一部分 Id1 与 CD133 在人结直肠癌组织中表达相关性 11 前 言 11 材料和方法 11 结 果 17 讨 论 24 第二部分 RNAi 沉默 Id1 对 HCT116 细胞干细胞相关特性的影响 26 前 言 26 材料和方法 26 结 果 40 讨 论 51 第三部分 RNAi 沉默 Id1 对 HCT116 细胞侵袭、转移的影响54 前 言 54 材料和方法 55 结 果 59 讨 论 66 参考文献 70 致 谢83 综 述84 攻读博士期间发表论文 105 英文缩略词表 Bcl-2 C RC CSCs CSLCs ECM B-cell CLL-lymphoma -2 Colorectal cancer Cancer stem Cells Cancer stem-like cells Extracellular matrix B 细胞淋巴瘤原癌基因 2 结直肠癌 癌症干细胞 癌症干细胞样细胞 细胞外基质 EGF Epidermal growth factor 重组表皮生长因子 EMT Epithelial-mesenchymal transition 上皮间质转化 EpCAM Epithelial cell adhension molecule 上皮细胞粘附分子 EZH2 Enhancer of zeste homolog 2 组蛋白甲基化转移酶 FGF Fibroblast growth factor 成纤维生长因子 HLH Helix-loop–helix 螺旋-环-螺旋 IHC Immunohistochemistry 免疫组织化学 Id Inhibitors of differentiation 分化抑制因子 MET Mesenchymal-epithelial transition 间质上皮转化 MMPs Matrix metallo-proteinases 基质金属蛋白酶 PARP Poly ADP-ribose polymerase 聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶 PCNA Proliferating cell nuclear antigen 增殖细胞核抗原 qRT-PCR Qquantitive real-time polymerase chain reaction 实时荧光定量聚合酶链反应 ShRNA TIMP1 Short hairpin RNA Tissue inhibitor of metalloproteinases 1 发夹 RNA 基质金属蛋白酶组织抑制因子 1 TIMP2 Tissue inhibitor of metalloproteinases 2 基质金属蛋白酶组织抑制因子 2 TIMPs Tissue inhibitor of matrix metalloproteinases 基质金属蛋白酶组织抑制剂 1 中文摘要 背景和目的： 结直肠癌（Colorectal Cancer, CRC）发病率占所有癌症中第四位，其死亡率 占第二位。虽然结直肠癌患者目前可以得到以手术、化疗和放疗等多种手段的综 合治疗，大约有 40%的患者即使进行综合治疗后依然出现复发和转移，5 年生存 率仅 50%左右。越来越多的证据表明，CRC 的发展过程中肿瘤干细胞样细胞（Cancer stem- like cells ，CSLCs）或者肿瘤干细胞（Cancer stem cells ，CSCs）具有重要 的作用，是促进肿瘤复发、侵袭、转移的关键因素。 近年来，研究发现分化抑制因子1（Inhibitors of differentiation 1, Id1）在多种 癌症中高表达，包括乳腺癌、前列腺癌、肺癌、胃癌、食管癌和CRC，是新的肿 瘤相关基因。Id1在其他癌症中被证明具有促进肿瘤生长、侵袭和转移的作用， 同时具有维持胚胎干细胞和神经干细胞自我更新的功能。虽然，在CRC中，仅有 少量的研究表明Id1具有促进早期血行转移和调节CSCs的自我更新的作用，但是， Id1对CRC肝转移以及肠癌CSCs相关特性的影响需要进一步验证，并且其中可能 存在的机制值得进一步探讨。 因此，本次研究，我们首先分析Id1和最常见的肠癌干细胞标志物CD133的表 达之间关系,以明确Id1和CD133表达相关性及其临床意义；其次，采用慢病毒介 导的RNA干扰基因水平抑制HCT116细胞Idl表达, 观察Id1基因沉默后体外自我更 新功能的变化, 体内启动肿瘤生长能力的改变，并且探讨肠癌干细胞最重要的信 号通路（Wnt/β-catenin通路）是否受到影响；最后，我们将探索沉默Idl基因 对HCT116细胞体外上皮