第十五章分离分析法导论1.pptVIP

* 第十五章 分离分析法导论 第一节 概述 色谱法 1906年 俄国植物学家 Tsweet 分离植物色素 * 第一节 概述 混合物的分离过程就是各组分在两相间不断进行着的分配过程。 一相固定不动 (如CaCO3) —— 固定相 另一相是携带试样混合物流过此固定相的流体（气体或液体）（如石油醚）——流动相 * 第一节 概述 色谱法的分离原理：当混合物随流动相流经色谱柱时，就会与柱中固定相发生作用（溶解、吸附等），由于混合物中各组分物理化学和结构上的差异，与固定相发生作用的大小、强弱不同，在同一推动力作用下，各组分在固定相中的滞留时间不同，从而使混合物中各组分按一定顺序从柱中流出。 色谱是一种分离技术。与适当的柱后检测方法结合，实现混合物中各组分的分离与检测。构成色谱分析法。 * 第一节 概述 色谱分析法的分类 1. 按两相状态分类 气体为流动相的色谱称为气相色谱（GC） 固定相是固体吸附剂——气固色谱（GSC） 固定相是固定液（附着在惰性载体上的薄层有机化合物液体）——气液色谱（GLC） * 第一节 概述 液体为流动相的色谱称液相色谱（LC） 液相色谱亦可分为液固色谱（LSC）和液液色谱（LLC）。 超临界流体为流动相的色谱为超临界流体色谱（SFC）。 * 第一节 概述 2. 按分离原理分类 利用组分在吸附剂（固定相）上的吸附能力强弱不同而得以分离的方法，称为吸附色谱法。 利用组分在固定液（固定相）中溶解度不同而达到分离的方法称为分配色谱法。 利用组分在离子交换剂（固定相）上的亲和力大小不同而达到分离的方法，称为离子交换色谱法。 * 第一节 概述 利用大小不同的分子在多孔固定相中的选择渗透而达到分离的方法，称为凝胶色谱法或尺寸排阻色谱法。 利用不同组分与固定相（固定化分子）的高专属性亲和力进行分离的方法称为亲和色谱法，常用于蛋白质的分离。 九十年代快速发展、特别适合生物试样分析分离的高效分析仪器，高效毛细管电泳法。 * 第一节 概述 3. 按操作形式分类 固定相装于柱内的色谱法，称为柱色谱。 固定相呈平板状的色谱，称为平板色谱，它又可分为薄层色谱和纸色谱。 * 第二节 色谱图及常用术语 （一）色谱图和色谱峰 由检测器输出的电信号强度对时间作图，所得曲线称为色谱流出曲线。曲线上突起部分就是色谱峰。 如果进样量很小，浓度很低，在吸附等温线（气固吸附色谱）或分配等温线（气液分配色谱）的线性范围内，则色谱峰是对称的。 * 第二节 色谱流出曲线及有关术语 1. 基线 无试样通过检测器时，检测到的信号即为基线。 2. 色谱保留值 保留时间（tR）:组分从进样 到柱后出现浓度极大值时所 需的时间； 死时间（t0）:不与固定相作 用的非滞留组分（如空气）的 保留时间； 调整保留时间（tR＇）： tR＇= tR－t0 * 第二节 色谱流出曲线及有关术语 保留体积（VR） VR = tR×F0 （ m L / min ） F0为柱出口处的载气流量 死体积（V0） VM = t0 ×F0 调整保留体积(VR＇) V R＇ = VR －V0 * 第二节 色谱流出曲线及有关术语 3. 相对保留值g 2,1 组分2与组分1调整保留值之比： g 2,1= t′R(2) / t′R(1)= V′R(2) / V′R(1) 相对保留值只与柱温和固定相性质有关，表示了固定相对这两种组分的选择性。与柱径、柱长、填充情况（物理指标）及流动相流速无关。在色谱法中，可以用作定性分析的依据。 * 第二节 色谱流出曲线及有关术语 4. 峰高、峰宽、峰面积 （1）峰高h （2）峰宽 衡量色谱峰宽度的参数，三种表示方法： (i) 标准偏差(?)：即0.607倍峰高处色谱峰宽度的一半。 (ii)半峰宽(Y1/2)：色谱峰高一半处的宽度 Y1/2 =2.355 ? (iii)峰底宽(Y或Wb)：Y=4 ? （3） 峰面积A A=1.065h Y1/2 * 5.分配系数K和分配比k’ （1）. 分配系数（ partion factor） K 组分在固定相和流动相间发生的吸附、脱附，或溶解、挥发的过程叫做分配过程。在一定温度和压力下，组分在两相间分配达到平衡时的浓度之比值，称为分配系数，用K 表示，即： 第二节 色谱流出曲线及有关术语 * 分配系数是由组分和固定相