黄芩茎叶总黄酮对泡沫细胞形成的影响-内科学专业毕业论文.docxVIP

中文摘要黄芩茎叶总黄酮对泡沫细胞形成的影响 中文摘要 黄芩茎叶总黄酮对泡沫细胞形成的影响 摘 要 目的：新近的研究认为，动脉内皮发生损伤时释放细胞 因子，趋化血流中的单核细胞游走进入动脉内皮下、增殖进 而表达A型清道夫受体(SR—A)转变成巨噬细胞，巨噬细 胞氧化从血浆渗透到内皮下的低密度脂蛋白(LDL)形成氧 化型低密度脂蛋白(Ox—LDL)，再通过其细胞膜上的SR．A 无反馈抑制地摄取Ox．LDL，使巨噬细胞转变成含大量脂质 的泡沫细胞。大量泡沫细胞堆积，在动脉内皮下形成脂质条 纹，大量的脂质条纹相互融合形成脂质斑块。所以，泡沫细 胞的形成是动脉硬化的早期事件。这是动脉粥样斑块形成的 机制之一。 本研究旨在(1)用人类单核肿瘤细胞株U937建立新型 泡沫细胞模型： (2)黄芩茎叶总黄酮(TF)对单核细胞生 长的影响； (3)TF对泡沫细胞形成的影响。进而初步探索 黄酮抗动脉硬化的机制，并为开发利用承德丰富的黄芩资源 提供理论依据。 方法：(1)为了建立U937巨噬细胞源性泡沫细胞模型， 8瓶U937细胞分成对照组4瓶和模型组4瓶，细胞密度106 个／ml，对照组细胞培养液中含胎牛血清(FCS)10％、LDL 100mg／L，模型组培养液中另加佛波酯(PMA)t00¨g／L，370C、 5％CO：、饱和湿度培养72小时，收集细胞涂片用油红0染 色观察细胞形态，并测定细胞内总胆固醇含量； (2)为了 观察TF对U937细胞生长的影响，取2块24孔板，每孔中 中文摘要接种U937细胞5×104个／ml，培养液中含10％FCS和不同浓 中文摘要 接种U937细胞5×104个／ml，培养液中含10％FCS和不同浓 度的TF，根据TF浓度不同分为六组，分别是TF0mg／L、 TF25mg／L、TF50mg／L、TFl00mg／L、TFl50mg／L、TF200mg／L 组，每组接种8孔， 37。C、5％C02、饱和湿度培养7天， 在此期间每24小时一次测定每孔的细胞密度，绘制细胞生 长曲线。第7天测定细胞悬液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性； (3)为了观察TF对泡沫细胞形成的影响，取2块24孔板， 每孔中接种U937细胞2．5×106个／ml，培养液中含FCS lO％、 LDL 100mg／L、PMA 100rtg／L和不同浓度的TF，根据TF浓 度不同分为六组，分别是TF 0mg／L、TF25mg／L、TF50mg／L、 TFl00mg／L、TFl50mg／L、TF200mg／L组，每组8孔，37。C、 5％CO，、饱和湿度培养72小时，收集培养细胞测定细胞内 总胆固醇(TCH)含量和蛋白质定量，细胞涂片油红O染色 观察细胞内脂质蓄积情况，并测定细胞培养液中Ox—LDL的 浓度。 结果： (1)模型组细胞内大量油红O染色阳性的脂质 颗粒，而对照组细胞形态无变化，细胞内无脂质颗粒。模型 组细胞内TCH 520．13+37．52mg／g蛋白，高于对照组 39．474-9．26mg／g蛋白，两组差别有显著性(t=35．18 p0．001)。(2)TF25—200mg／L各组生长曲线均低于TF0mg／L 组，细胞增殖减缓，TF0—150mg／L各组细胞培养液中LDH 与细胞密度比值分别为6．19+0．41、5．92士0．93、10．16+0．42、 5．44士0．28、4．14=k0．64，差别无显著性，而TF200mg／L组细 胞培养液中LDH与细胞数比值为58．13士8．96，高于其它各 组，差别具有显著性(F=131．176 p0．001)。 (3)油红0 染色形态学显示，细胞内脂质颗粒随TF浓度的增加而呈减 中文摘要少趋势，细胞内TCH含量(mg／g蛋白)由高到低顺序排列 中文摘要 少趋势，细胞内TCH含量(mg／g蛋白)由高到低顺序排列 分别为TF0mg／L(520．13：t：37．52)、TF25mg／L(375．39+39．78)、 TF50mg／L(366．49+35．76)、TFl50mg／L(263．55t27．72)、 TFl00mg／L(254．26士25，55)、TF200mg／L(249．23+22．69) mg／g蛋白，差别具有显著性(F=86．36 p0．001)。 TF0．25mg／L时细胞培养液中Ox．LDL浓度分别为21．13士2．30 和19．38+4．50，高于TF 50—200mg／L组(分别为12．884-4．09， 12．384-1．30，8．504-2．07，14．29：t：5．3399／d1)，差别有极显著性 (F=40．73 p0．0001)。 结论；(1)新型U937巨噬细胞源性泡沫细胞模型建立 成功； (2)TF具有抑制U937细胞生长增殖的作用，但TF 浓度在200mg／L时，对体