毛柄金钱菌子实体菌柄细胞壁伸长生长的研究-微生物专业毕业论文.docxVIP

直立蛭蓖盔堂亟土堂焦迨窒 直立蛭蓖盔堂亟土堂焦迨窒 垂揸金毯笪至塞熊鱼栖绁照壁地量生照丝丛窥 摘要 采用在离体条件下重组热灭活的细胞壁伸长生长测定方法，从各种富含多 糖水解酶的粗酶制剂中筛选到一种作用于毛柄金钱菌(金针菇，用a删』』肋 velutipes)菌柄细胞壁的伸长蛋白，此蛋白能引起菌柄细胞壁的伸长生长。对 筛选到的粗酶制剂通过Bio—Gel p-60分子筛层析、DEAE—Cellulose离子交换 层析以及高效液相色谱的Synchropak％00阳离子交换层析，获得电泳纯的分 子量约21KD的蛋白，此蛋白加入到细胞壁伸长测定仪小室溶液中可以立即引起 菌柄细胞壁的快速伸长。该蛋白不含几丁质酶活性，B一葡聚糖酶活性亦未发 现，对木葡聚糖和葡甘露聚糖均无作用，在中国科学院上海生物化学研究所蛋 白质组学研究分析中心利用Lcq—DECA—XP质谱法对该蛋白进行测序分析，结果 表明现存蛋白质库中没有匹配片断；在哈佛大学该蛋白经胰蛋白酶裂解后同时 使用Edman与LS／Ms／Ms两种方法测序，获得两个肽段，分别为EFItWAVPK七肽 和MFSNDVLAR九肽的氨基酸序列，CenBank中也没有找到相同序列的蛋白，也 未发现与之匹配的肽段，推测可能为一新蛋白。在筛选过程中另外发现了一种 新的B一1，3一葡聚糖酶，在SDS中呈现一条分子量为33kD的电泳条带。此蛋白 对微晶纤维素没有水解酶活性但是对大麦B一葡聚糖有很强的水解酶活性，它不 具有引起菌柄细胞壁伸长的功能。特性研究表明该酶的最适温度和最适pH分别 为37C和4．5，在pH低于8．0时酶较稳定．通过质谱LCQ—DECA—XP肽谱分析法 未找到与之完全匹配的肽段，推测可能为一新的内切0一l，3一葡聚糖酶。 关键词：金针菇，细胞壁，菌柄伸长，伸长蛋白，0一l，3～葡聚糖酶 fII 直塞衄堑盔堂堡±堂僮趋童 直塞衄堑盔堂堡±堂僮趋童 垂擅垒丛萱王塞垃萱擅担胞壁!史量垒芷盟疆塞 Abstract We identifled Fl,蚴Mina veJutipes stipe cell walIs extension protein from 0一91ucuronidase with potent ability to induce extension of heat—inactivated stipe cell walls．It could increase rate of extension at very short times when i t was added in the room of extensmeter．It was purified and separated by gel fiitration，ion— exchange chromagraphy and HPLC Synchropak$300 ion—exchange ehromagraphy．By SDS—PAGE，the molecular weight of protein estimated as 2IKD．It has hydrolytie enzyme activiues against chitin，and did not exhibit B—glucananase and Xyl091ucanase，Glucomananase activities．Through analysis of using mass spectrum of LCQ—DECA—XP at Shanghai／nstitues for Biological Scienees，we had not found matching fragments．In Haward Universi ty，the method of Combinent Edman and LS／MS／MS was adopted，we gained two fragments of EFIIWAVPK and MFSNDVLAR；but also did not find the completely matching fragments and conferred it as a unknown protein．We also find a 33Kb B—I，3-glucanase．It has strong hydrolytic enzyme activity against barley B—glucan，but did not exhibi t eellulose activities．The optimal temperature and pH of this enzyme were 37C and 4．5．Respectively，the