鳗弧菌灭活疫苗对海水养殖大菱鲆的免疫预防作用研究-海洋生物专业毕业论文.docxVIP

鳗弧菌灭活疫苗对海水养殖大菱鲆的免疫预防作用研究摘 鳗弧菌灭活疫苗对海水养殖大菱鲆的免疫预防作用研究 摘 要 大菱鲆(＆ophthalmus maximus)是近年来我国引进的一个优良海水养殖品 种，经济价值高，但随着养殖规模的不断扩大，大菱鲆的病害问题目益严重，给 养殖业造成巨大的经济损失，其中鳗弧菌(Vibrio anguillarum)是海水鲆碟鱼类 危害最严重的细菌病原之一。多年来一直使用广谱抗生素和化学药物进行鱼类细 菌病害的防治，致使病原菌的抗药性增加，且药物残留对水环境的污染日益严重， 水产品的质量下降，所以迫切需要有效的大菱鲆病害防治疫苗，而我国未见有关 大菱鲆的免疫研究报道，国外关于大菱鲆的鳗弧菌疫苗研究也少有报道。基于此， 本论文研究了大菱鲆幼鱼对鳗弧菌w．1灭活疫苗的免疫应答水平、免疫保护力、 免疫应答时间及二次免疫反应。 分两批次用甲醛灭活的鳗弧菌w一1疫苗进行了大菱鲆幼鱼的免疫试验。第一 次试验中，鱼苗较小，水温1 5-19℃，用灭活的鳗弧菌W．1疫苗分别以浸泡、注 射接种的方式对大菱鲆鱼苗进行免疫试验，时间持续6周，每隔一定时间采血分 离血清，用微量血凝试验测定血清中的特异抗体效价，并在免疫后第4周，用浓 度为3．7x108cfu／ml的鳗弧菌w—l活菌腹腔注射大菱鲆0．2ml／尾进行攻毒感染试 验。结果表明灭活鳗弧菌w．1疫苗能刺激大菱鲆鱼苗产生特异性免疫反应。其中 注射免疫鱼在免疫后l周内即检测到特异抗体，并持续上升，6周后仍维持在较 高的水平，注射免疫组最高抗体效价达1228．8，免疫保护力为91，7％。浸泡免疫 组在三周后可检测到特异抗体，并在第4周开始下降，其最高抗体效价为36，免 疫保护力为33．3％。 第二次试验中，鱼苗较大，水温12．16C，以福尔马林灭活的鳗弧菌w．1疫 苗注射免疫大菱鲆鱼苗，于8周后同法进行二次免疫。从首次免疫开始分别于4 周、8周、15周采血测特异抗体效价，以检测免疫保护时间及二次免疫后抗体效 价的变化。结果显示：第一次免疫后在15周之内抗体效价水平一直处在较高的较 稳定的水平，第l 5周的抗体效价仍为405，效价水平下降得较慢；而且在加强免 疫后效价水平大幅度升高。 从发病的大菱鲆病鱼肌肉患处新分离到一株优势菌TM01，回接感染试验表 明该菌为大菱鲆的致病菌，进行了该病原菌的药敏试验，经常规生理生化及分子 明该菌为大菱鲆的致病菌，进行了该病原菌的药敏试验，经常规生理生化及分子 生物学初步鉴定为鳗弧菌(Vibrio anguillarum)。并将其制成甲醛灭活疫苗，通过 注射免疫大菱鲆鱼苗和大菱鲆亲鱼检测其免疫应答水平。其中大菱鲆鱼苗免疫鱼 抗体效价在免疫后6周内一直呈上升趋势，最高达1382，4周后测得的免疫保护 率为50％；大菱鲆亲鱼免疫后抗体效价产生较慢，效价水平较低，但下降缓慢， 免疫3个月后仍维持抗体效价54。 关键词：大菱鲆， 鳗弧菌，鉴定， 灭活疫苗， 免疫保护力 Study Study on the vaccination against Eanguillarum in farmed marine turbot Abstract Culture of turbot，Scophthalmus maximus，a species of high commercial value，has grown rapidly since it was introduced into China several years ago． Infectious diseases，especially the vibriosis caused by Vanguillarum，commonly occur where the fish is farmed in intensive conditions and contribute to the severe losses of the turbot cultural industry．Control of fish diseases using therapeutics such as antibiotics has problems including potential development of resistant bacteria，consumer concern over drug residues and environmental impacts．Moreover， the presence of antibiotic residues in fish products is a major obstacle to international trade Immunoprphyllaxis is the