绿原酸对氧化应激损伤人视网膜色素上皮细胞保护作用的分子机制-眼科学专业毕业论文.docxVIP

摘要 摘要 万方数据 万方数据 摘 要 目的： 观察绿原酸（CGA）对过氧化氢诱导的氧化应激损伤人视网膜色素上皮细 胞(ARPE-19)的保护作用，通过观察视网膜色素上皮细胞在过氧化氢处理后细胞 凋亡相关分子的表达变化，探讨绿原酸对氧化应激的视网膜色素上皮细胞的抗 凋亡作用及其可能的分子机制，为将来临床上利用绿原酸治疗年龄相关性黄斑 变性等与氧化应激相关的眼病提供理论依据。 方法： 1、参考国外相关文献，以 500uM 浓度的过氧化氢(H2O2)作用于 ARPE-19 人视网膜色素上皮细胞 24h，建立氧化应激损伤模型。 2、WST-1 细胞增殖实验检测绿原酸对 ARPE-19 人视网膜色素上皮细胞的 毒性，绿原酸处理细胞 24h 后待检。 3、实验分三组：正常对照组，过氧化氢建模组，绿原酸保护组。WST-1 细 胞增殖实验检测各组细胞存活率。 4、采用流式细胞仪检测每个实验组 ARPE-19 细胞的凋亡率。 5、通过 RT-PCR 检测每个实验组细胞的 Bcl-2 和 Caspase-3 基因表达水平。 6、通过 Western blot 检测每个实验组细胞的 Bcl-2 和 Caspase-3 蛋白表达水 平。 结果： 1、不同浓度的 CGA（12.5uM，25uM,50uM,100uM,200uM）处理 ARPE-19 人视网膜色素上皮细胞 24 h 后，各实验组 ARPE-19 细胞的相对细胞活力（cell viability） 与 对 照 组 相 比差 异 无 统 计 学 意 义 ； 说 明 0~200uM 浓 度 的 CGA 对 ARPE-19 人视网膜色素上皮细胞没有表现出明显的毒性作用。 2 、 各 实 验 组 的 相 对 细 胞 活 力 H2O2 建 模 组 低 于 对 照 组 （ P ＜ 0.05 ） ， 50uM,100uM,200uM 的 CGA 保护组高于 H2O2 建模组（P＜0.05）；说明 H2O2 能够诱导 ARPE-19 人视网膜色素上皮细胞氧化应激损伤，而 CGA 具有保护过 氧化氢诱导的 ARPE-19 人视网膜色素上皮细胞的氧化应激损伤的作用。 3、各实验组细胞凋亡率（%）正常对照组为 8.31±2.87，H2O2 建模组为 II ±8.82，绿原酸（100uM）保护组为 29.43±6.80。结果显示建模组的细胞凋 亡率高于正常对照组的凋亡率（P＜0.05），绿原酸保护组的细胞凋亡率低于 H2O2 建模组的凋亡率（P＜0.05）；说明 H2O2 能够诱导 ARPE-19 人视网膜色素上皮 细胞凋亡，绿原酸具有抗 ARPE-19 人视网膜色素上皮细胞凋亡作用。 4、RT-PCR 结果显示 Bcl-2mRNA 表达水平 H2O2 建模组低于正常对照组而 绿原酸保护组高于 H2O2 建模组（P＜0.05），Caspase-3mRNA 表达水平 H2O2 建 模组高于正常对照组而绿原酸保护组低于 H2O2 建模组（P＜0.05）；说明绿原酸 保护过氧化氢诱导的 ARPE-19 人视网膜色素上皮细胞的氧化应激损伤时上调 Bcl-2 基因的表达，下调 Caspase-3 基因的表达。 5、Western blot 结果显示 Bcl-2 蛋白表达水平 H2O2 建模组低于正常对照组 而绿原酸保护组高于 H2O2 建模组（P＜0.05），Caspase-3 蛋白表达水平 H2O2 建 模组高于正常对照组而绿原酸保护组低于 H2O2 建模组（P＜0.05）；说明绿原酸 保护过氧化氢诱导的 ARPE-19 人视网膜色素上皮细胞的氧化应激损伤时上调 Bcl-2 蛋白的表达，下调 Caspase-3 蛋白的表达。 结论： 1、绿原酸对氧化应激损伤的 ARPE-19 人视网膜色素上皮细胞具有保护作用, 而对正常的 ARPE-19 细胞没有表现出明显的毒性作用。 2、绿原酸对 H2O2 诱导的氧化应激损伤 ARPE-19 人视网膜色素上皮细胞具 有抗凋亡保护作用，其可能通过增强 Bcl-2 基因和蛋白表达以及抑制 Caspase-3 的基因和蛋白发挥保护作用。 关键词：人视网膜色素上皮细胞、ARPE-19 细胞、绿原酸、氧化应激、细胞凋 亡、保护、机制。 III Ab Abstract ABSTRACT Objective： To observe the protective effect of chlorogenic acid （ CGA ） to the hydrogen peroxide-induced oxidative stress in human retinal pigment epithelium cells （ARPE-19）and the changes of apo