蜜蜂病毒与东方蜜蜂微孢子虫对熊蜂的跨种侵染-特种经济动物饲养专业毕业论文.docxVIP

独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得 的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含 其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得云南农业大学或其它教育 机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡 献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 研究生签名： 时间： 年 月 日 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解云南农业大学有关保存、使用学位论文的管理办法及规定，即： 云南农业大学有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以 采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意云南农业大学可以 用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。 (保密的学位论文在解密后应遵守此协议) 研究生签名： 时间： 年 月 日 导师签名： 时间： 年 月 日 I I 目 录 摘 要1 Abstract 2 1 前 言4 1.1 国内外研究现状4 1.1.1 危害熊蜂的病毒研究进展 4 急性麻痹病毒(Acute bee paralysis virus, ABPV) 5 黑蜂王病毒(Black queen cell virus, BQCV) 5 残翅病毒(Deformed wing virus, DWV) 6 克什米尔病毒(Kashmir bee virus, KBV) 7 1.1.2 危害熊蜂的微孢子虫研究进展 8 1.1.2.1 微孢子虫的形态与系统遗传学8 1.1.2.2 微孢子虫的分布与流行病学10 1.1.2.3 微孢子虫的检测鉴定与病理学10 1.1.2.4 微孢子虫的预防与控制 11 1.2 本研究的目的、意义和技术路线12 1.2.1 研究目的及意义 12 1.2.2 主要内容与技术路线 13 1.2.2.1 黑蜂王病毒（BQCV）与残翅病毒（DWV）对熊蜂的侵染 13 1.2.2.2 东方蜜蜂微孢子虫的检测鉴定13 1.2.2.3 东方蜜蜂微孢子虫对小峰熊蜂的侵染13 2 材料与方法15 2.1 黑蜂王病毒（BQCV）与残翅病毒（DWV）对熊蜂的侵染 15 2.1.1 实验材料 15 2.1.1.1 主要仪器与试剂15 2.1.1.2 熊蜂的饲养与采集16 2.1.2 实验方法 16 2.1.2.1 熊蜂及花粉 RNA 的提取 16 RT-PCR 检测 7 种常见病毒 17 BQCV 和 DWV 正负链感染检测 19 BQCV 与 DWV 的系统进化分析 22 II II 不同虫态中 BQCV 与 DWV 的 qRT-PCR 22 2.2 东方蜜蜂微孢子虫的检测鉴定23 2.2.1 实验材料 24 2.2.1.1 主要仪器与试剂24 2.2.1.2 微孢子虫的来源24 2.2.2 实验方法 24 2.2.2.1 东方蜜蜂微孢子虫的提取与纯化24 2.2.2.2 电镜样品制备与观察25 2.2.2.3 双重荧光染色与观察25 2.3 东方蜜蜂微孢子虫对小峰熊蜂的侵染26 2.3.1 实验材料 26 2.3.1.1 主要仪器与试剂26 2.3.1.2 小峰熊蜂的饲养26 2.3.2 实验方法 27 2.3.2.1 东方蜜蜂微孢子虫感染小峰熊蜂27 2.3.2.2 小峰熊蜂中肠电镜样品的制作27 2.3.2.3 不同时期不同组织东方蜜蜂微孢子虫的 qRT-PCR 27 3 结果与分析31 3.1 黑蜂王病毒（BQCV）与残翅病毒（DWV）对熊蜂的侵染 31 3.1.1 BQCV 与 DWV 的 RT-PCR 扩增结果 31 3.1.2 花粉中病毒检测结果 31 3.1.3 熊蜂 BQCV 与 DWV 的感染率情况 32 3.1.3.1 不同种熊蜂的病毒感染情况32 3.1.3.2 不同组织熊蜂的病毒感染情况34 3.1.3.3 不同虫态熊蜂的病毒感染率34 3.1.3.4 不同蜂群熊蜂的病毒感染情况36 3.1.4 熊蜂 BQCV 与 DWV 正负链检测结果 39 熊蜂 BQCV 与 DWV 正负链扩增图 39 熊蜂 BQCV 与 DWV 正负链扩增情况 40 3.1.5 熊蜂 BQCV 与 DWV 的系统进化分析 40 3.1.6 熊蜂 BQCV 与 DWV 的感染量情况 42 3.2 东方蜜蜂微孢子虫的检测鉴定44 3.2.1 东方蜜蜂微孢子虫的外部形态 44 PAGE PAGE IV 3.2.2 东方蜜蜂微孢子虫的内部超微结构 44 3.2.3 双重荧光染色鉴定微孢子虫活性 45 3.3 东方蜜蜂微孢子虫对小峰熊蜂的侵染48 3.3.1 东方蜜蜂微孢子虫感染熊蜂的生物学观察 48 3.3.2 东方蜜蜂微孢子虫感染熊蜂中肠超微结构变化