酶法制备生物柴油新工艺及其高值化技术探索-生物化学与分子生物学专业毕业论文.docx

华 华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文 摘 要 生物柴油是新型绿色可再生燃料，主要以动植物油脂为原料，通过酯交换 工艺制备而成，可代替石化柴油。相对于化学法制备生物柴油的诸多缺陷，酶法 制备工艺因反应条件温和、甲醇用量少、无污染等优点成为当前生物柴油开发的主 流发展方向。 乌桕是我国特有的木本油料植物，因油脂含量高而有“中国植物牛油”、 “石 油树”等美称。该油脂中因含有毒酚类物质而不宜食用，但其十八碳脂肪酸的含量 近 90%，为制备生物柴油的理想原料。本文以乌桕梓油为对象，以脂肪酶为催 化剂，研究生物柴油制备新方法，并尝试基于生物柴油的高值化技术探索。主要 研究工作和创新点摘要如下： （1）对乌桕梓油理化性质和成分进行了测定和分析。油脂成分和理化性质可 以反映油脂品质，进而影响生物柴油产品性能。检测结果显示，该油脂含有7种脂 肪酸，以十八碳脂肪酸为主，碳链长度和结构非常适合作为制备生物柴油的原料； 其酸值适中，含微量磷脂，但皂化值偏大。该结果为酶法制备乌桕梓油生物柴油提 供了可行性分析。 （2）对自行固定化洋葱伯克霍尔德菌 G63 脂肪酶在微水相体系中催化乌桕梓油 制备生物柴油的工艺参数进行了优化。获得最佳工艺参数：醇油摩尔比 4：1，脂肪 酶用量 2.7%，反应温度 41℃。在此条件下，生物柴油得率为 96.22%。R2(0.9819)显 示该回归模型可准确预测乌桕梓油生物柴油的得率。在最优反应条件下重复使用 20 批次后，生物柴油得率仍然保持在 90%以上，表明该固定化酶具有良好的操作稳定 性。 （3）以“乒乓反应机理”为基础，首次构建了 G63 脂肪酶催化转酯动力学模 型，实验验证该模型能较好地预测 G63 脂肪酶的转酯反应速度。抑制常数 Ki = 0.21 mol/L，表明甲醇对该反应存在一定的抑制作用；反应常数 k3 = 0.0549 L/mol．min，显 示该酶对甘油三酯的二位酯键存在选择性。以上数据和分析表明该酶对底物存在 I 一定程度的位置特异性。 （4）系统研究了 Novozym 435/Lipozyme TL IM 复合酶催化转酯制备生物柴油 的工艺及动力学特征。通过改变介质种类和配比，确定能较好维持脂肪酶活性及稳 定性的最佳溶剂组合——6：4（v/v）的乙腈与叔丁醇组合。进而通过响应面法优化反 应条件，获得最佳参数：醇油摩尔比为 6.4：1，复合酶用量为 4.32%，分子筛用量为 5.5%， 反应 20h 后甲酯得率达 96.38%。重复使用 360h 后酶活依旧稳定，显示该反应体系具 有很好的操作稳定性、耐醇性及底物适应性。 3（5）构建并比较了复合酶体系与单酶体系的催化转酯动力学模型。复合酶体系 的 Vmax（3.67 mol/L．min）大于单酶体系 Vmax（3.25 mol/L．min），而 KmTG 和 KmCH OH 3 均小于单酶体系的；复合酶体系抑制常数 K（i 0.013 mol/L）则略低于单酶体系的（0.019 mol/L）。由此推论，在底物与酶的结合方面，复合酶体系要优于单酶体系，而复合 酶体系转酯反应的抑制效应要小于单酶体系，首次从动力学角度证实 Novozym 435/Lipozyme TL IM 复合酶作用酯键存在一定的正协同效应。 （6）初步探索了基于生物柴油的高附加值精细化工品的合成工艺，以期扩大生 物柴油的利润空间。以自制的乌桕梓油生物柴油为原料，膨润土为催化剂，催化制 备二聚酸甲酯。优化获得的最佳二聚酸甲酯合成工艺条件：催化剂用量为 9.9%，助 剂用量为 0.8%，在 221℃下反应 6.1h，二聚酸甲酯的得率为 63.2%，与预测值 65.26% 非常接近。由于二聚酸甲酯是多能中间体，因此该工艺为生物柴油进一步高值化提 供了前期工艺准备。 （7）对生物柴油和二聚酸甲酯的生产进行了初步经济效益分析。以年加工规模 2.5 万吨生物柴油为例，通过对其前期投入、生产成本和销售总额的估算，分析得出 酶法制备生物柴油具有良好的市场前景，其深加工产品二聚酸甲酯更是具有诱人的 经济效益。由此可见，大力发展生物柴油是一项利国利民的战略举措。 关键词：脂肪酶；生物柴油；乌桕梓油；动力学；高值化 II PAGE IV PAGE IV Abstract Biodiesel is one of the newly green bio-fuels with non-edible oils as raw material, and preparation through transesterification. It is an ideal substitution for fossil diesel. Compared with chemical preparati