绵羊妊娠早期骨髓表达ISG15和PIBF的研究-养殖专业毕业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 独创性声明 本人郑重声明： 所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究 工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或 集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得河北工程大学或其他教育 机构的学位或证书而使用过的材料。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体， 均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本人完全意识到本声明的法律结果 由本人承担。 学位论文作者签名： 签字日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解 河北工程大学 有关保留、使用学位论文的规 定。特授权 河北工程大学 可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库 进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同 意学校向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子文档。 （保密的学位论文在解密后适用本授权说明） 学位论文作者签名： 签字日期： 年 月 日 导师签名： 签字日期： 年 月 日 摘要 摘要 万方数据 万方数据 摘 要 免疫器官由中枢免疫器官和周围免疫器官两部分组成，其中中枢免疫器官包 括骨髓和胸腺。骨髓是 T 淋巴细胞的出生地，骨髓的重要功能就是生成各种细胞 的干细胞，这些干细胞通过分化再生成各种血细胞如红细胞、白细胞、血小板等， 因此，骨髓不但是造血器官，对于维持机体的生命和免疫力也非常重要。为探索 绵羊妊娠早期对中枢免疫器官骨髓的影响，本试验以繁殖机能正常的绵羊为试验 动物，研究妊娠早期绵羊骨髓表达 ISG15 和 PIBF 因子的的变化规律。首先对绵羊 埋植孕激素海绵栓，进行同期发情处理，进而试情并配种（对照组不配种）。然后 采集发情后第 16 天未配种的，以及配种后第 13、16 和 25 天妊娠的绵羊骨髓（通 过屠宰解剖，确定配种后第 13、16 和 25 天妊娠的绵羊，即看到孕体的存在）。将 不同妊娠天数的骨髓分别置于 2mL 冷冻管中保存在-196℃液氮中，带回实验室检 测 mRNA 的表达和蛋白印迹分析。另外采集不同妊娠天数的绵羊骨髓，用 PBS 液 冲洗后将骨髓块放入 4%多聚甲醛的 PBS 溶液中固定，用于免疫组织化学检测。得 到了如下结果： 1、利用实时荧光定量 PCR 法检测和蛋白印迹分析发现，妊娠早期绵羊骨髓中 的 ISG15 mRNA 和蛋白的表达量从未妊娠到妊娠期逐渐升高，ISG15 mRNA 和蛋 白在妊娠 16 天羊骨髓中的表达量高于未妊娠 16 天，妊娠 13 天和妊娠 25 天。而 且在妊娠 16 天表达量达最高。然后，到妊娠 25 天表达量则会逐渐降低。通过免 疫组织化学检测确认，ISG15 蛋白在妊娠 16 天羊骨髓中的染色强度高于未妊娠 16 天，妊娠 13 天和妊娠 25 天，而且主要在骨髓间质的细胞质表达。总之，绵羊妊 娠早期 ISG15 mRNA 和蛋白表达量的增加与孕体来源的干扰素 tau 有关。 2、mRNA 和蛋白水平进行了 PIBF 因子表达的检测，证明在妊娠 16 天羊骨髓 中 mRNA 的表达量高于未妊娠 16 天，妊娠 13 天和妊娠 25 天。而且在妊娠 16 天 表达量达最高。然而，到妊娠 25 天 mRNA 表达量则会逐渐降低，蛋白水平的表达 与 mRNA 水平的表达基本一致，在妊娠 13 天、妊娠 16 天和妊娠 25 天羊骨髓中的 表达，在未妊娠 16 天的骨髓中不表达。妊娠 16 天和 25 天骨髓 PIBF 蛋白的表达 量显著高于妊娠 13 天，妊娠 16 天和妊娠 25 天的骨髓中 PIBF 蛋白的表达明显， 基本没有差异。 总之，在绵羊妊娠早期，孕体来源的干扰素 tau 通过血液循环，作用于骨髓， 使骨髓间质的细胞上调表达 ISG15 mRNA 和蛋白；同时结果表明，妊娠早期 PIBF 也上调表达，可能是干扰素 tau 通过血液循环抑制黄体的退化，使黄体持续产生孕 酮，从而诱导 PIBF 蛋白上调表达，调节骨髓的免疫功能，使绵羊胚胎免受母体免 I 疫系统的排除，有利于妊娠的继续。 关键词：妊娠；骨髓；干扰素刺激基因 15 KDa 蛋白；孕酮诱导阻断因子 II Abstract Abstract Abstract The immune organ is composed of central immune organs and peripheral immune organ, and the central immune organ contains bone marrow a