麋鹿AFLP分子标记系统的建立及其遗传多样性评估-动物学专业毕业论文.docxVIP

浙江大学硕士学位论文致谢 浙江大学硕士学位论文 致谢 致谢 两年半的研究生时光，转瞬即逝。回顾初来时，我还是一个对科研懵懵隘 憧的门外汉，而今无论实验室技能还是科研思维等都有了很大的提高，且顺利 完成了毕业论文的实验部分和撰写。此外，对自己也有了更为深刻的认识，未 来的定位和规划也迈步清晰越来。而这一切，都离不开实验室导师和同学的指 导、帮助和关怀。 最为感谢的是我的导师方盛国教授和万秋红副教授。正是因为方老师的青 睐，我才有军在进入科研世界，进行廉鹿这个富有传奇色彩的中国特有物种的研 究。而方老师高瞻远瞩的学术眼光、严谨的治学态度、镇密的逻辑思维和出众 的演讲才能，让我莫名钦佩，给予我的科研、学习和生活深深地脂油。在这研 究生学习生涯中，每每遇到问题，万老师深厚的学术功底、敏锐的洞察力和富 有创造力的思维总能给我很多启发，难题迎刃而解。感谢您们，正是有了您们 孜孜不倦的教诲和指导，才使我的求学之路硕果累累，在此对您们致以真诚的 敬意和真挚的感谢。 特别感谢葛老师和巳毕业的果海龙师兄在廉鹿样品采集过程中的努力，他 们的不辞卒劳保证了实脆能顺利开展。另外，感谢葛云法老师对维持整个实验 室正常运作付出的辛勤工作和作为德育导师对我们学生的关怀指导。张培师姐 和倪小伟师兄对我科研工作亦提供了很多的指导和帮助，在此表示由衷的感 谢。 感谢曾在实验室朝夕相处过的兄弟姐妹们，他们分别是:毕业的赵莎莎师 姐、连虹师姐、章鹦鹦师姐和在读的陈艺那师姐、叶青师兄、张培师姐、何刑 师姐、朱英师姐、龚杰师兄、倪小伟师兄、陈礼诚、李灵、曾倩倩、陈辉、蓝 胀、李雯娟、楼暨康、吴少英、孙丹丹、孙启鹏、喻斌及杨海琼等。大家共同 创造维护的实验室的良好环境和融洽气氛，让我的研究生学习生活丰富而充 实，这段时光如此美好，我将终生难忘。 最后，感谢我的家人，他们对找一如既往的支持和鼓励，使我能专心的投 入学业，不晰获得成长。 匡叶叶 2011 年 1 月 摘要 摘要 摘要 廉鹿 (Elaphurus davidianus) 是我国 I级重点保护的珍稀濒危动物，野生 种群在经历了商周的鼎盛时期之后开始走向衰落。至十九世纪末，廉鹿在我国 本土灭绝，而早期自我国引入欧洲的仅存 18 只个体被集中散放于英国的乌邦 寺庄园，成为了全球现今 3000 多只廉鹿的奠基种群。 第一次世界大战后，乌邦寺的朦鹿种群问渐扩大，并开始对外输出。 其中，北京南海予北京鹿鹿生态实验中心于 1985 年重引入朦鹿 38 只，建 立了廉鹿自本土灭绝以来我国的第一个人工散放式半放养种群。 然而，廉鹿在经历了十九世纪末极其严重的瓶颈效应以及其后乌邦寺 庄园对外输出的多次间歇性瓶颈效应之后，究竟还保留着怎样的遗传 多样性这一科学问题，一直深受学术界的关注。鉴此，本文在建立 AFLP 分 子标记检测体系的基础上，通过对北京南海子北京廉鹿生态实验中心 245 只攘鹿的 AFLP 检测，获得了遗传多样性的相关参数，初步解答了学术界关注 的上述问题，其主要结果报告于后: …、廉鹿AFLP 分子标记系统的建立 (1)提取高质量、无降解的基因组 DNAo (2) 200-400吨的基因组 DNA 于 37C 经 0.5U 的 EcoRI 和 Mse 1 限制性双酶切 2h ，后20.C 接头连接 2h 。 。)1%琼脂糖凝胶咆泳检测，酶切和连接产物在 100-1500bp 范围，且里均匀 的弥散状分布。 (4) 两次 PCR 扩增前模板 DNA 均 1:10 稀释，用 1%琼脂糖凝胶电泳检测，其 预扩增产物主要在 100-800bp 范围且呈典型的弥散状分布。 (5) 6.5%变性聚丙烯毗版凝胶电泳检测选择性扩增产物，分子最大小分布在 50-700bp 范围。 二、康鹿遗传多样性的 AFLP 检测 利用从 64 对引物组合中筛选出的 E-AAC瓜ιCAG 、缸-AAC瓜ιCAT 、巴AAG 1MωCTC 、E-AAG/CTG 、E-ACC/M CAC 、E-ACC IM-CTT 、 ACT/M-CAC 、 E-ACT/M-C 丁A 、且-AGC/M CTA 、巳AGC/C丁丁及巴AGG爪ιCT丁等 11 对多态 性号|物组合进行种群的遗传多样性检测，获得了如下结果: (1) 在获得的 1086 个标记位点中， 75 个为多态位点。各引物组合多态百分率 (PPL) 在 3.70%-10.91% 之间，群体平均多态百分率 (PPL) 为 6.91%。 11 浙江大学硕士学位论文摘要 浙江大学硕士学位论文 摘要 II I I (2) 11 对引物细合的 75 个多态位点的个体累积识别率达 100%，此AFLP 分 子标记完全能够区分北京廉鹿生态实验中心鹿鹿种群的所有个体，即 诙牒鹿种群的每