课件：二蛋白质生工.ppt

双向电泳 在二维方向上对同一蛋白质样品先后进行两种不同性质的电泳，提高蛋白质电泳的分辨率。 先将蛋白质样品在一维方向进行等电点聚焦凝胶电泳，使蛋白质按等电点分离成条带；然后在换用SDS在二维方向电泳，使位于同一条带中的蛋白质按分子质量展开。 蛋白质的离子交换层析 与氨基酸的离子交换层析基本原理相同，流动相中的离子与固定相上可解离基团的可逆交换。 蛋白质所带电荷的种类和数目不同，与层析介质的结合力不同。首先用大量洗脱剂洗出未结合的杂蛋白，然后逐步提高洗脱剂离子强度（或改变pH），结合在凝胶上的蛋白质按照结合力从弱到强的顺序依次洗脱下来，分布收集洗脱液，即可获得分离的蛋白质。 根据蛋白质吸附特性分离蛋白质 利用介质表面的活性基团对流动相中不同组分吸附性能差异进行分离，当蛋白质颗粒接触到比表面积大的固体颗粒物质时，会受到表面基团的吸引而停留下来。 不同蛋白质分子表面的极性与非极性氨基酸残基的数目、比例及分布不同，与固体颗粒物质的吸附作用力也就不同。 根据生物分子特异亲和力分离蛋白质 首先将特异配基共价连接到惰性凝胶（如葡萄糖、琼脂糖）等颗粒上制成亲和层析介质。 当蛋白质混合物流经亲和层析介质，只有目标蛋白能与配基结合；用缓冲溶液洗脱除去未结合的杂蛋白，最后改变洗脱条件，把目标蛋白给洗脱下来。 蛋白质鉴定 蛋白质分子质量鉴定——SDSSDS（十二烷基硫酸钠）是蛋白质变性剂，可破坏蛋白质分