毛细管电泳法研究铁卟啉和去铁胺之间的相互作用-生物化工专业毕业论文.docxVIP

华 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 I I 摘 要 研究药物与致病因子之间的相互作用，可以对药物在体内产生的作用机制有所 了解，进而为药代动力学和药理毒理方面的研究提供参考依据。这在新药物的开发 过程中具有重要作用。亲和毛细管电泳法(ACE)是被广泛使用的一种测定物质之间结 合常数的方法。它是将一系列不同浓度的受体(或配体)作为添加剂溶于缓冲液中，制 备运行溶液，然后将固定浓度的配体(或受体)作为样品。受、配体的结合物对配体的 表观淌度产生影响，通过配体迁移率的变化可以求出结合常数。 多个研究证明铁螯合剂去铁胺(DFO)能与铁卟啉(hemin)形成DFO-hemin复合物， 进而影响hemin导致的组织损伤。本文首次使用亲和毛细管电泳的方法，研究DFO和 hemin相互作用的一些化学信息，为在临床上广泛应用的DFO，提供一些药理学和毒 理学方面的有用信息。 本文对电泳实验的各个条件进行考察，确定了最佳的电泳操作条件。选用hemin 为样品，20 mmol/L硼酸溶液(pH=8.6)为缓冲液，DFO作为缓冲液添加剂。选用管总 长为60.2 cm，有效长度为50 cm的毛细管进行实验。首先，研究了分别在以下温度时 (20℃、25℃、30℃、37℃)，不同浓度的DFO(10～80 μM)对hemin(80 μM)迁移率的影 响，运用Scatchard方程拟合，计算出了温度在20℃、25℃、30℃、37℃时，DFO和 hemin的结合常数K分别为12.43×104 M–1、10.113×104 M–1、7.57×104 M–1、3.46×104 M–1。结果表明，随着温度的升高，结合常数逐渐降低，但DFO与hemin在20～37℃之 间都存在较强的结合能力(K值的数量级为104)。依据Van’t Hoff方程，求出20～37℃ 时，结合反应的吉布斯自由能变ΔG在-26.94 ～ -28.58 kJ?mol–1之间。通过将lnK对1/T 进行线性拟合，由斜率及截距可计算出DFO与hemin相互作用的热力学参数焓变ΔH 为 –56.61 kJ?mol–1、熵变ΔS 为–94.77 J?mol–1?K–1。以上热力学数据表明，该结合反 应是放热且自发进行的。 关键词：亲和毛细管电泳；去铁胺；铁卟啉；相互作用；结合常数；热力学参数 II II Abstract Research on the interaction between drug and the virulence factors contributes to understanding the mechanism of drugs working in body, which provides reference for pharmacokinetics and toxicology study. This plays an important role in the process of developing new drugs. Affinity capillary electrophoresis (ACE) is widely used to determine the binding constants between different substances. In this method a series of receptor (or ligand) at different concentrations are dissolved in buffer as additive, and used to be running buffer. Ligand (or receptor) at fixed concentration is the detected sample. The complex of ligand and receptor affects the apparent mobility of ligand, and the binding constant can be calculated through the mobility change of ligand. Several studies have shown that iron chelator desferrioxamine(DFO) can combine with hemin to form DFO-hemin complex, which would affect tissue damage induced by hemin. This thesis is the first time applying affinity capillary