抗枣疯病相关基因的克隆与分析-植物学专业毕业论文.docxVIP

摘 要 枣（Ziziphus jujuba Mill.）为鼠李科（Rhamnaceae）枣属（Ziziphus Mill.）植物，是 我国特有的宝贵种质资源和重要的特色果树。枣疯病由植原体（phytoplasma）引起，是 枣树上最严重的毁灭性病害之一。利用抗病种质资源，借助分子生物学手段和方法克隆 抗病基因，对开展分子育种具有重要意义。前期研究中本课题组已经发现在骏枣品种中 存在对枣疯病的抗病和感病品系。本研究利用 AFLP 和 SON-PCR 技术，以骏枣抗病和 感病品系为试材，进行了基因组水平上的差异表达分析，并利用获得的差异片段进行了 侧翼序列的延伸。主要结果如下： 1．通过骏枣抗病和感病品系的 AFLP 分析，获得了 11 条差异片段。应用 56 对选 择性引物对对骏枣的枣疯病抗性和感病品系进行 AFLP 分析，最终利用筛选出的 10 对 特异性较好的引物进行扩增和差异片段的筛选，最终确定并分析了了 11 条差异片段， 其中 6 条是与抗病相关的，5 条是与感病相关的。 2. 建立了一套适合于枣未知基因侧翼序列扩增的 SON-PCR 技术体系。本试验应用 传统的 SON-PCR 技术体系不能获得理想的试验结果，经在原有体系基础上进行改进和 优化，即将第二、三轮嵌套扩增由原来的一步扩增都分为两步进行。主要是将第二、三 轮的嵌套扩增中的线性延伸单独列出，从而增加了反应的特异性和高效性。试验证明改 进后的 SON-PCR 体系能够有效地得到目的差异条带，获得理想结果。 3. 利用本试验建立的改进 SON-PCR 技术将一条抗性相关片段（165bp）延伸到了 1119bp。利用改进的 SON-PCR 技术将抗性相关片段 R1（165bp）上游延伸了 390bp， 下游延伸了 564bp，拼接后长度为 1119bp。利用 NCBI 数据库，进行了 Blast 比对分析， 此序列与白杨中编码 SAUR 家族蛋白（SAUR3）的 mRNA 序列有 80%的相似性；通过 开放阅读框的寻找，结果显示此序列含有一个不完整的开放阅读框，多个起始密码子， 不含终止密码子，此部分开放阅读框编码 161 个氨基酸，其中在第 24 个氨基酸和第 121 个氨基酸之间存在 SAUR（Small auxin-up RNAs）超家族蛋白的保守序列。 关键词：枣；枣疯病；AFLP；SON-PCR；差异表达片断 Cloning and Analysis of the Genes Related tothe Resistance of Jujube Witches’ Broom Disease Candidate: Qiao Yong Major: Botany Supervisor: Professor Zhao Jin Professor Liu Mengjun Abstract Chinese jujube (Ziziphus jujuba Mill.), a precious germplasm resources originated from China and a kind of important and specific fruit trees in China, belongs to family Rhamnaceae. Jujube witches broom disease (JWB), caused by phytoplasma, is one of the most serious and destructive diseases of Chinese jujube. It is important to clone the resistant gene by using molecular biology from resistant resources. In preliminary studies, our group had found that there were resistant and sensitive strains in Junzao. By the aid of AFLP analysis and SON-PCR, resistant and sensitive strains in Junzao were employed in this study. The differential bands related to the resistance of JWB on the level of DNA were screened by AFLP and then the flanking sequence of one differential band was extented successfu