透射电镜使用及常规样品观察.docVIP

电镜技术头验报告 1 = 姓名： 专业: 学号: 口期： 成绩: 任课老师： 实验名称： 实验二：透射电镜使用及常规样品观察 一、实验目的: 了解透射电了显微镜的基本原理、电镜生物标本的制备方法及电镜金属 标本的制备方法和观察 二、实验原理： 透射电子显微镜是以图象方式提供样品的检测结果，其成像的决定因素 是样品对入射电子的散射，包括弹性散射和非弹性散射两个过程。薄样品成 像吋，未经散射的电子构成背景，而像的衬度取决于样品各部分对电子的不 同散射特性。采用不同的实验条件可以得到不同的衬度像。透射电子显微镜 不仅能显示样品显微组织的形貌，而且可以利用电子衍射效应同样获得样品 晶体学信息。 透射电镜的构造及与光学显微镜比较: 照明系统二 成像系统 透射电子显微镜透射光学显微镜 照明系统二 成像系统 透射电子显微镜 透射光学显微镜 三、 仪器与材料： 仪器：JEM-2100型透射电子显微镜、超薄切片机、恒温箱、400目铜网 等 材料：金样品 四、 实验内容： 1、 了解透射电镜生物标本超薄切片的制备： 取材：用锋利的刀片切取lmin3目标样本组织，立即投入固定液中，取 材要迅速，以防止细胞缺氧发生超微结果变化； I古I定：把样本立即投入到0. lmol/L(PH7.4)的二甲碑酸钠缓冲液配制 的2.5%戊二醛中,4°C固定2小时。然后用0. lmol/L (pH7.4)的二甲碑酸 钠缓冲液洗三次，再放入用相同缓冲液配制的1%娥酸中固定2小时(4°C)； 脱水； 浸透； 包埋； 聚合：把装有标本和包埋剂的胶囊置35、45、60温箱中各24小时，使 包埋剂聚合，硬化，由流体变为均匀的固体； 超薄切片：一般透射电镜的切片厚度不能超过lOOmn,通常超薄切片厚 度为 50-70nm； 染色：将样本置于枸缘酸铅染液中染色，l%NaOII溶液洗一次，水洗二 次，干燥后观察。 2、 透射电镜标本的制备(由老师完成)：一个金样品超薄切片 2、用透射电镜观察金样品 3、对所观察样晶进行拍照 五、实验结果及思考： 实验结果以照片形式附在最后。 思考： 1、 透射电镜的制样目的：要使样品做的很薄，以利于电子束的穿过。 2、 什么是超薄切片技术：超薄切片技术包括：取材、固定、脱水、浸 透、包埋、切片及染色。电镜样品采用戊二醛和餓酸双重固定，用酒精或 丙酮脱水，环氧树脂进行包埋。 3、 铜网的构造及其作用：铜网一般直径为3毫米，上面铳有许多微米 大小的孔，在铜网上覆盖了一层很薄的火棉胶膜并在上面蒸镀了碳层以增加 其膜的强度，被分析样品就承载在这种支撑膜上。 4、 SEM照片与TEM照片比较：SEM图象是三维的，而TEM图象是平而二 维的；SEM图象的标尺一般比TEM的大近十倍；SEM图象反应的是样品表面 的信息，而TEM图象反应的是样品内部结构。 铜 网 铜网网孔 铜网上的膜 金颗粒电子衍射图 测量金颗粒电子衍射图半径：由内圈到外圈， 半径依次为：4. 17 l/nm 4. 71 l/nm 7. 03 l/nm 8. 34 1/nm