局部Ad-miR-126基因治疗促进小鼠缺血后肢血管新生作用的研究.doc

[键入文字] 第四军医大学硕士学位论文 [键入文字] 染色，免疫组化CD31、a-SMA染色，实时定量PCR检测miR-126水平以及Western-blot 对 ERK1/2 、pERK1/2、AKT 和 pAKT 蛋白水平的检测。整理、统计数据。 实验结果 通过体外构建 Ad- mir-126 测序结果正确(见附录), 质粒鉴定结果(见正文)正确, 病毒的 PFU 滴度达 2.00×10 9（PFU/mL）。通过局部注射于小鼠的缺血腓肠肌中后， 观察到 HE 染色、CD31、α-SMA 免疫组化染色检测结果一致，均显示 C 组较 A、B 两组血管内皮细胞增生明显，新生血管数目计数明显增多。实时定量 PCR 检测显示 A 组第 3 天 miR-126 表达水平明显降低，此后呈逐渐增高的趋势，直至第 14 天还未 及正常水平。而 C 组第 3 天 miR-126 表达水平高于正常水平，至第 7 天达最高水平， 然后逐渐降低，至第 14 天时仍高于正常水平。Western-blot 检测结果显示 C 组较 A、 B 组 VEGF、bFGF 等介导的 IP3 和 MAPK 信号通路中 pERK1 和 pAKT 活化水平增 高。 结论 体外构建重组腺病毒 mir-126，测序结果正确，质粒鉴定结果完全正确，滴度可 达 2.00×10 9（PFU/mL），说明此技术既安全又高效，是完全可行的。C57 小鼠缺血 后肢中内源性 miR-126 的表达水平明显降低，通过 Ad‐mir-126 局部注射于 C57 小鼠 缺血后肢，可以明显的提高缺血局部 miR-126 的表达水平，观察到促进缺血局部血 管新生的作用，并且初步探讨了 miR-126 是通过激活 Akt、ERK1/2 的相关通路，来 促进小鼠缺血后肢血管新生的作用机制。 6 [键入文字] 第四军医大学硕士学位论文 [键入文字] Local Ad-miR-126 gene therapy to promote neovascularization in mouse ischemic hindlimb Candidate for master: Zeng Shuhong Supervisor: Guo Shuzhong Tutor:Yi Chenggang Department of Plastic Surgery, Xijing Hospital, Fourth Military Medical University, Xi’an 710032, China Sponsored Programs:The National Natural Science Foundation The Military Twelfth Five-Year key project（BWS11C061） Abstract Keywords: miR-126; ischemic hindlimb; adenovirus; neovascularization; Research background Tissue transplantation is the most common clinical treatment in plastic surgery.The thicker and larger transplanted tissue are not easily survival, because they can not be promptly and effectively reconstructed blood circulation in tolerance to ischemia time. It is still must be faced huge difficulty of clinic extensive application in plastic surgery.Therefore, resconctruting blood circulation promptly and effectively after transplanted operation is key to improve the survival rate and survival quality of transplanted tissue. The key of resoving these problems is still whether blood circulation are promptly and effectively reconstructed. An important way to achieve this objective is to be promptly