隆线溞生长发育及其表皮蛋白基因的研究-动物学专业论文.docxVIP

中文摘要隆线潘(Daphnia 中文摘要 隆线潘(Daphnia carinata)俗称鱼虫，是水生浮游动物的重要组成之一。隆线 潘属于节肢动物门、甲壳纲、潘科、潘属。水潘富含高蛋白物质是淡水鱼类和无脊 椎动物的优良天然饵料；同时它能够指示环境中的有毒物质，经常被作为指示生物。 此外，隆线潘其独特的生殖方式是国内外学者研究的热点。当环境条件较好的时候， 例如温度、食物、密度等比较适宜，它进行孤雌生殖，产出的后代都是雌潘，我们 把这种只孵化出雌潘的卵称为孤雌生殖卵，也叫夏卵。当环境条件恶化时进行两性 生殖，它不仅产雌体还产雄体，雌体和雄体交配后产出冬卵，待环境条件好转后， 冬卵再孵化成孤雌生殖的潘。探究其生殖转化的内在机理是众多学者兴趣所在，然 而，国内外对其生殖机理的研究大多停留在环境刺激下某个基因的表达情况，对生 殖转化的调控机制尚不清楚。 角质层蛋白基因(cuticle protein gene)又叫表皮蛋白基因，根据该基因蛋白保 守基序的不同可以分为CPR、CPF、CPFL、CPG和CPT五个家族，每个家族都有其 独特的结构和性质。动物表皮蛋白的形成与该基因息息相关。表皮蛋白是一种结构 蛋白，它和几丁质一起组成抵御外界环境的屏障一角质层。隆线潘进行两性生殖 时其冬卵形成的厚厚的角质层外壳，具有抵御外界环境中各种不良条件的影响。徐 晓倩等进行了隆线；疆cDNA文库的构建，发现cuticle protein gene在两性潘体内大量存 在，而在孤雌潘体内存在的量相对较少，所以推测该基因可能与参与隆线潘的生殖 转化过程。本文通过控制外界环境条件，促使隆线潘从孤雌生殖转变为两性生殖， 并对该潘的cuticle protein gene进行分析研究，旨在为探究枝角类生殖转化的研究提 供一些理论基础。本文研究的主要结果如下： 1若干生态因子对隆线潘生长生殖的影响 本文通过调控温度、pH、密度、食物和化学物质等外界环境因子的刺激，从而 研究这些生态因子对隆线潘生长及生殖转变的影响。本实验发现任何单因子对隆线 潘的刺激并不能使之当代就能产生生殖转化，但对其内禀增长率(rrn)、周限增长 潘的刺激并不能使之当代就能产生生殖转化，但对其内禀增长率(rrn)、周限增长 率(九)、平均世代周期(T)、净生殖率(Ro)、平均寿命、第一陈卵日、平均生殖 间隔期和总生殖量均有改变。温度对隆线浸的生命参数有显著影响，30℃组的内禀 增长率(m)、周限增长率(九)和平均世代周期(T)均显著高于其他组，但是该 组的平均寿命、第一怀卵日和平均生殖间隔期均低于其他组。p瞰寸隆线潘生命参数 影响总体上不明显，pH 7、8、9和10各组之间没有显著差异，但pH 6组与其他各组 差异较显著，该组的内禀增长率(rm)和周限增长率(九)显著高于其他组。本实 验还发现若多个生态因子同时刺激隆线潘，并且使之多代都生活在同一恶劣环境刺 激下，一个月之内必然出现大量冬卵。由此初步推断，枝角类的生殖转化是在多种 环境因子刺激下，并且在每一代体内积累，最终导致其发生生殖转化。但本实验尚 未清楚具体是哪一代潘发生了生殖转化，亦未能对此现象进行定量分析，只是初步 的定性分析，具体工作有待进一步深入研究。 2 隆线潘Cuticle protein基因的DNA序列克隆与分析及其在孤雌潘和两性涵体内 差异性表达 本研究在已经建立的隆线潘eDNA文库的基础上克隆得到编码角质层蛋白的 基因。该基因cDNA全长781bp，编码219个氨基酸的蛋白，5UTR(untranslated reagion， 非编码区)为27bp，3UTR为101bp。BlastP分析表明该eDNA推导的氨基酸序列与 大型滔、卤虫、按蚊等节肢动物的Cuticle protein序列具有较高的相似性。 Cuticle protein基因全长1600bp，由四个外显子和三个内含子组成，同大型涵的Cuticle protein 基因有相似的结构，其内含子片段都很短。用RT．PCR检测孤雌泾和两性潘Cuticle protein基因表达分析结果显示，该基因在两性潘中表达量较高，在孤雌溢中亦检测 到该基因但其表达量较低。本研究结果表明Cuticle protein基因参与了隆线潘生殖转 化的过程，但其具体的调控机制尚未清楚有待进一步研究。 关键词：隆线潘，生长，生殖，表皮蛋白基因 ABSTRACTCarinata(Daphnia ABSTRACT Carinata(Daphnia carinata)commonly known as fish food，and it was an important component of zooplankton．Carinata belongs to Arthropoda,Crustac