散血草乙醇提取物对小鼠血管内皮瘤细胞生长影响的研究-外科学（小儿外科）专业论文.docxVIP

目 目 录 1 散血草乙醇提取物对小鼠血管内皮瘤细胞生长影响的研 1．1 中文摘要 1 1．2 英文摘要 3 1．4 材料与方法 7 1．5 结果 28 1．6 讨论 · ··35 1．7 结论 38 1．8 参考文献 39 1．9 英汉缩略词对照表 42 2 致谢 43 3 婴幼儿血管瘤的治疗进展(综述) 44 万方数据 散血草乙醇提取物对小鼠血管内皮瘤细胞生长影响的研究 散血草乙醇提取物对小鼠血管内皮瘤细胞生长影响的研究 摘要 目的：中药用于肿瘤的辅助治疗是目前一个新的热点研究领域。散血 草是一种常见的祖国传统中草药，应用历史悠久。本课题拟通过研究散血 草乙醇提取物对体外培养的血管内皮瘤细胞(EOMA细胞)生长和凋亡的 影响，探讨其对于血管瘤内皮细胞生长的可能影响，为散血草治疗血管瘤 奠定细胞学基础及理论依据，为治疗血管瘤提供新的方法。方法：利用小 鼠血管内皮瘤细胞株进行体外细胞培养，将实验细胞分为阴性对照组：B1 (单纯PBS溶液处理)和不同浓度散血草乙醇提取物干预组：B2(添加药 物为100 u g／mL的散血草乙醇提取物)、B3(添加药物为lmg／mL的散血 草乙醇提取物)三组。利用乙醇回流法获得的散血草乙醇提取物，作为试 验药物。用散血草乙醇提取物干预培养的细胞。观察比较三组体外培养的 EOMA细胞在药物作用下，干预24h、48h、72h后的细胞生长情况。HE染 色检测细胞形态学改变。Ki67标记流式检测三组细胞增殖情况；使用流 式细胞术(Annexin V／PI染色法)测定不同浓度药物作用后三组细胞的 凋亡情况； RT—PCR(半定量)检测其VEGF mRNA表达情况。免疫荧光 染色检测各组细胞VEGFR蛋白的表达。所得数据结果用均数±标准差 (；±s)表示，两样本均数比较使用独立样本t检验；多个样本两两比 较先使用方差分析(ANOVA)后再使用多样本两两比较中的SNK法进行比 较，实验数据使用SPSSl7．0软件分析处理，设定PO．05表示差异有统 计学意义。结果：在干预后24h、48h、72h分别观察各组EOMA细胞生长 情况，见对照组血管内皮瘤细胞生长旺盛，在72h就铺满2／3以上的培养 万方数据 瓶底部，呈贴壁生长，细胞外形呈梭形，局部有克隆聚落形成。而散血草 瓶底部，呈贴壁生长，细胞外形呈梭形，局部有克隆聚落形成。而散血草 提取物干预组细胞生长相对缓慢、稀疏，聚落生长不明显，尤以lmg／mL 组为甚。在干预后72h，正常对照组Ki67表达结果为160．13±4．57， 100 u g／mL加药组表达结果为107．81±11．65，lmg／mL加药组表达结果为 37．41±1．16。在干预后第24、48、72小时时间点上，100 u g／ml药物组 和lmg／mL药物组细胞Ki67平均荧光强度较对照组低，差异具有统计学意 义(P(0．05)；lmg／mL药物组细胞平均荧光强度值较100 u g／ml药物组 低，差异具有统计学意义(P0．05)。在干预后72h，正常对照组细胞凋 亡表达结果为2．15±O．22，100 u g／mL加药组表达结果为54．04±4．87， lmg／mL加药组表达结果为77．95±2．93。在干预后第24、48、72小时时 间点上，100 u g／ml药物组、lmg／mL药物组细胞凋亡率均较对照组高，差 异具有统计学意义(尺O．05)；lmg／mL药物组细胞凋亡率较100 u g／ml药 物组高，差异具有统计学意义(以0．05)。在干预后72h，100 u g／m1药物 组、lmg／mL药物组VEGFmRNA的表达较对照组低，差异具有统计学意 义，(P(0．05)：lmg／mL药物组VEGFmRNA的表达又较100 u g／ml药物 组低，差异具有统计学意义(P 40．05)。在干预后72h各组细胞VEGFR免 疫荧光检测均为阳性表达，各组间单个细胞上的VEGFR表达无明显差异， 但由于药物干预组细胞生长缓慢、凋亡增加，故同样大小视野内VEGFR表 达对照组最多，lmg／ml组最低。结论：散血草乙醇提取物在体外有抑制 EOMA细胞生长、促进其凋亡的作用。其对EOMA细胞的作用机制可能与其 下调EOMA细胞VEGF的表达水平有关。 关键词： 散血草；血管内皮瘤；生长； 步‘可不p复f0厶。祝。 万方数据 The The research of Aj uga Ethanol Extract to the growthI—of mice EoM队cells Y28098甜 Abstract：Objective：Adjuvant treatment of traditional 乙nlnese medlclne (TCM)is currently a new hotpot