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赖氨酸对电纺
赖氨酸对电纺 PLGA 取向超细纤维降解的 pH 调控及生物相容性研究
赖氨酸对电纺 PLGA 超细纤维降解的 pH 调控及
生物相容性研究
摘 要
通过电纺丝方法制备的纳/微米级超细纤维材料是近年来广受关 注的一类组织工程支架构建材料。在各类电纺材料中,生物可降解的 合成聚?-羟基酸酯类材料,尤其是乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA),由 于具有良好的生物相容性、可控的生物降解性能以及较高的力学强度 等优点,已在工程化不同的生物组织和药物释放领域中获得广泛应 用。但是 PLGA 的酸性降解产物会导致支架周围环境的 pH 下降,从 而引起生物相容性问题。目前国内外虽然有较多的生物可降解聚酯类 材料在生物医药领域中的应用---包括在组织工程和药物释放领域的 应用,以及对其体内和体外降解过程的研究,并取得了较大进展,但 是对于如何消除降解产物的酸性作用,并克服由此带来的负面影响的 研究则不是太多。
为了解决此问题,本文报道了在 PLGA 超细纤维中引入一种碱性 赖氨酸(Lys)来研究其对 PLGA 的酸性降解产物的酸度(pH)中和 作用。着眼于电纺 PLGA 纤维今后用于构建结构具各向异性的致密结 缔组织(如:肌腱、韧带等),我们首先利用稳定射流电纺的方法成
I
功制备出负载 0、10、20、30% Lys 的 PLGA 取向超细纤维。之后对
Lys/PLGA 复合取向超细纤维的形貌、成分和聚集态结构、热学性能、 力学性能等进行表征。然后将纯的 PLGA 以及负载有 Lys 的 PLGA 纤维浸入到 PBS 溶液(pH 6.86)中,在 37 ?C 下进行体外降解实验, 并在纤维降解过程中的特定时间点分别检测降解液的 pH 值、Lys 释 放速率和纤维质量损失率以及吸水率变化情况。结果表明:稳定射流 电纺法制备的纯 PLGA 纤维和 Lys/PLGA 复合纤维直径在 1 ?m 左右, 纤维形貌均一,取向度较好。Lys 的掺入能提高 PLGA 纤维的热稳定 性,力学性能如拉伸强度也获得显著提高,达到 89.97 ± 6.32 MPa
(大大高于纯 PLGA 纤维的 61.23 ± 3.67 MPa)。和纯 PLGA 纤维组 相比,含有 30% Lys/PLGA 纤维组的 PBS 溶液在经过 10 周降解后, 溶液 pH 值仅有较小程度的降低(5.25),而纯 PLGA、10% Lys/PLGA 和 20% Lys/PLGA 各纤维组降解液的 pH 值则分别降低至 2.49、2.82 和 3.55。由此可见,Lys 的加入能够为电纺 PLGA 纤维的降解提供一 种 pH 补偿效应,而且这种作用和 Lys 的添加量正相关。
接着,我们通过体外检测 L929 细胞在电纺 Lys/PLGA 复合纤维 支架上的生长和增殖情况和体内包埋实验来评价其生物相容性。细胞 的生长形态、增殖情况和分泌的胶原含量分别通过荧光染色、CCK8 以及羟脯氨酸试剂盒进行观察和测定。结果表明:L929 细胞分别在 支架材料上培养 1、4、7 d 后,通过荧光染色观察发现细胞较好的粘 附在材料上。CCK8 检测结果显示细胞能在 Lys/PLGA 复合纤维支架 上快速增殖,说明负载 Lys 的电纺 PLGA 纤维支架具有良好的细胞相
II
容性。之后,我们通过将细胞种植在含有纤维降解液的混合培养基中
来评价降解液酸性对细胞的影响,研究发现,和纯 PLGA 组产生的降 解液对细胞的影响相比,Lys 负载量高的 PLGA 复合纤维的降解液对 细胞的生长、增殖以及胶原生成影响较小。在体内生物相容性评价中, 通过将材料直接植入到 SD 大鼠背部,4 周之后取出,对组织进行 HE 染色处理,结果发现添加有 Lys 的 PLGA 复合纤维的 HE 切片中炎症 细胞要比纯 PLGA 纤维中的少很多,而且 Lys 含量越高,所引起的炎 症反应越低。
总之,本研究通过稳定射流电纺丝的方法成功地制备出 Lys 负载 量分别为 0、10%、20%、30%的 PLGA 复合纤维,发现电纺超细取 向 Lys/PLGA 复合纤维具有较好的理化特性,更为重要的是体外降解 实验发现,Lys 的引入对于调节由 PLGA 降解产生的酸性降
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