链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠外周神经病变免疫损伤和环孢素A的抑制作用-内科学内分泌与代谢病专业论文.docx

天津医科大学博士研究生学位论文中文摘要 天津医科大学博士研究生学位论文 中文摘要 链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠外周神经病变 免疫损伤和环孢素A的抑制作用 我们近几年在临床上开展的肾活检、皮肤活检和肌肉活检都证明，糖尿病人 体内存在广泛的多器官免疫损伤。多年来，糖尿病的防治都是以高血糖为中心的 治疗策略，因此糖尿病的慢性并发症的发病机理和临床处理都处于思想茫然和束 手无策的尴尬境地。为弄清糖尿病发病机制，更好地从疾病的源头预防和治疗糖 尿病及其并发症，我们开展了糖尿病多器官的病理免疫学的研究并尝试用环孢素 A进行干预。本实验是整个研究的一部分。 目的：糖尿病外周神经病变(diabetes peripheral neuropathy,DPN)是糖尿病常 见的慢性并发症之一寺申经电生理检查证实90％的糖尿病患者存在DPN。一般认为 高血糖是DPN发生的主要原因，氧化应激是糖尿病及其慢性并发症发生的共同环 节．然而临床实践证实强化血糖控制未能从根本上NILDPN的发生与进展。我们 的研究工作证实，STZ诱导的糖尿病大鼠存在多器官免疫损伤，活检发现糖尿病 患者的肾脏、皮肤和肌肉均存在免疫球蛋白的沉积，因此我们推测糖尿病及其慢 性并发症的发生可能是多器官免疫损伤的结果，感染一免疫一炎症一器官损伤一 功能障碍是疾病发生和发展的共同规律。 若干研究证实，糖尿病患者血循环中可检测到针对神经系统自身成分的抗 体，同时血液中的补体成分显著降低，这些抗体能否造成神经组织的损伤，补体 系统的激活是否参与了DPN的发生目前均无定论。核因子1圆(NF-r．B)是氧 化应激下游启动最早，也是最重要的转录调节因子，是联系氧化应激与炎症反应 的枢纽，免疫损伤是否参与了神经组织局部氧化应激的发生，csA能否抑制氧化 应激及下游NF-rB的激活?已经证实，肿瘤坏死因子吨(TNF-ct)参与了糖尿病 视网膜病变和糖尿病肾病的发生，抑制TN№在视网膜的表达可延缓糖尿病视网 膜病变的进展，CsAf]B否抑制TNF吨在神经组织的表达尚未见相关报道。 本研究拟从DPN可能存在的免疫损伤入手，以链脲佐菌素(sTz)诱导的 糖尿病大鼠为模型，分别从脊髓、脊髓背根神经节(DRG)和坐骨神经三个部 T 圣堡匡型查兰堡圭竺塞生堂堡丝奎位，评价DPN发生过程中神经组织局部的免疫学异常及其与氧化应激、炎症的 圣堡匡型查兰堡圭竺塞生堂堡丝奎 位，评价DPN发生过程中神经组织局部的免疫学异常及其与氧化应激、炎症的 关系，观察CsA对DPN的治疗效果，探讨免疫学机制在DPN发病机制中的作 用，为I瓶床防治DPN提供一定的依据。 方法：90只雄性SD大鼠，随机分为正常对照组(CON)、糖尿病组(DM)、低 剂量CsA治疗组(ML)、中剂量CsA治疗组(MM)、高剂量CsA治疗组(MH)和胰 岛素强化治疗组(MI)。以静脉注射STZ的方法制造糖尿病大鼠模型，成模后ML、 MM和MH组分别按照0．5 mg／kg·d、l mg／kg·d和2 mg／kg‘d皮下注射CsA，MI 组根据血糖水平给予皮下注射2—6u／d中效胰岛素，成模16周后处死。留取血、 尿标本分别检测肝功能、肾功能、胰岛素、尿蛋白和尿微量白蛋白；观察脊髓、 DRG和坐骨神经形态学变化；采用免疫组化和免疫荧光两种方法评价脊髓、DRG 和坐骨神经免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)和补体 C3b的表达；测定神经组织丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(T、SOD)、铜锌超 氧化物歧化酶(CuZn-SOD)、过氧化氢酶(cAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px) 水平；采用免疫组化方法测定上述部位NF-nB蛋白表达：采用RT--PCR和免疫 组化方法测定上述部位TNF--ct mRNA和蛋白表达水平。 结果：所有造模大鼠全部成模，实验期间低中高剂量的CsA干预治疗均未 造成大鼠肝肾功能损伤。电镜观察发现，16周龄糖尿病大鼠存在坐骨神经髓鞘 崩解和轴突萎缩，证实已经发生DPN。DM组大鼠轴突／髓鞘面积比值显著低于 CON组，中高剂量的CsA和胰岛素治疗均可延缓此种改变，低剂量CsA干预不 能有效改善上述异常。 糖尿病大鼠脊髓、DRG和坐骨神经均存在IgA、]gG、IgM和补体C3b的异 常沉积，坐骨神经IgA、IgG和C3b平均光密度值与轴突／髓鞘面积比值存在显 著负相关：中高剂量的CsA治疗可有效抑制上述物质在神经组织的沉积，胰岛 素治疗不能纠正此种异常改变，低剂量CsA干预仅对上述部分指标有效。 糖尿病大鼠脊髓、DRG和坐骨神经局部MDA水平显著升高，DRG和坐骨 神经T-SOD、CuZn-SOD、CAT和GSH-Px水平均显著降低，脊髓仅CuZn-SOD 和GSH-Px水平显著降低；中高剂量的CsA和胰岛素