陆地棉纤维次生壁加厚期基因表达谱分析-遗传学专业论文.docxVIP

华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书学位论文 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书 学位论文 是否保密 否 如需保密，解密时间 年 月 日 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究 成果．尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已 经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位 或证书而使用过的材料，指导教师对此进行了审定．与我一同工作的同志对本研究 所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意． ● 研究生张竹史札。 帆驯年／月『日 学位论文使用授权书 本人完全了解华中农业大学关于保存、使用学位论文的规定，即学生必须按照 学校要求提交学位论文的印剧本和电子版本；学校有权保存提交论文的印刷版和电 子版，并提供目录检索和阅览服务，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存， 汇编学位论文．本人同意华中农业大q：,-r以用不同方式在不同媒体上发表、传播学 位论文的全部或部分内容，同时本人保留在其他媒体发表论文的权力． 注：保密学位论文(印涉及技术秘密、商业秘密或申请专利等潜在需要提交保密的 论文)在解密后适用于本授权书． 学位黻储娩似嗜导师张名古承 签名日期： 弘11年多月1日 签名日期： 弘11年 Z月 1日 英文缩略表 英文缩略表 ．VI 1前言 ～l 1．1棉纤维的发育过程 1 1．1．1分化起始期 2 1．1．2伸长期 3 1．1．3次生壁加厚期 4 1．1．4脱水成熟期 4 1．2影响棉纤维强度形成的主要因素 ．．4 1．2．1基因型 4 1．2．2激素 5 1．2．3温度 5 ．1．2．4纤维超分子结构 6 1．3棉纤维次生壁加厚期的研究进展 ．．6 1．3．1棉纤维次生壁加厚的生理生化过程 6 1．3．2棉纤维次生壁加厚相关酶系 7 1．3．3棉纤维次生壁加厚相关基因的克隆和表达 。10 1．4基因芯片技术 ．12 1．4．1基因芯片的原理 ．12 1．4．2基因芯片的制作 ．．12 1．4．3基因芯片在棉花纤维发育研究中的利用 ．13 1．5本研究的目的与意义 ．．15 2材料与方法 16 2．1植物材料 l 6 2．1．1重组自交系群体的构建 ．16 2．1．2材料种植 l 6 2．1．3取材 ．17 2．2棉纤维总RNA提取和质量检测 17 2．2．1棉纤维总RNA提取 l 7 2．2．2 RNA质量检测 ．1 9 2．3 cDNA芯片杂交和数据处理 j ．．19 2．3．1芯片杂交方案设计 ．19 2．3．2芯片杂交程序 一19 2．3．3芯片数据的获得与处理 ．20 2．4数据分析 ．．20 华中农业大学201 华中农业大学201 l届硕士研究生学位论文 2．4．1聚类分析一 ．20 2．4．2差异表达基因的筛选 21 2．4．3 GO功能显著性富集分析 2 1 2．5荧光定量PCR 22 2．5．1 eDNA第一链合成 22 2．5．2 Real-time PCR ．．22 3结果与分析 25 3．1纤维品质表现 ．．25 3．2 RNA质量 ．．25 3．3棉花纤维不同发育时期基因表达谱分析 ．26 3．3．1芯片数据的获得 ．．26 3．3．2芯片可靠性分析 。26 3．4芯片数据分析 。29 3．4．1聚类分析 。29 3．4．2差异表达基因的筛选 。30 3．4．3 GO功能显著性富集分析 ．．．． ．．32 3．5荧光定量PCR ．．46 3．5．1扩展蛋I刍(GhExp)基因表达模式 47 3．5．2纤维素合成酶(GhSuS)、蔗糖合成酶(GhSuS)和p．1，3．葡聚糖酶基 因表达模式 ．．48 4讨论 ．52 4．1 cDNA芯片技术的优越性和可靠性 。52 4．2棉花纤维发育过程中存在大量的差异表达基因 ．52 4．3高比强与低比强材料的纤维发育进程不同步 ．53 4．4纤维次生壁加厚阶段中碳的流向 ．54 4．5与次生壁加厚相关的差异表达基因或代谢过程 ．．55 4．5．1次生代谢与棉纤维发育的关系 55 4．5．2小G蛋白与棉纤维发育关系 ．56 4．5．3依赖于RNA的RNA聚合酶活性基因 ．57 4．6研究材料的探讨 ．．57 参考文献 。59 致谢 ．66 附蜀之 ．．． 一67 段的不断发展和成熟，棉纤维发育分子机理得到了较为深入的研究，并取得了一系 段的不断发展和成熟，棉纤维发育分子机理得到了较为深入的研究，并取得了一系 列的重要进展。然而这些研究主要集中在纤维细胞的起始和伸长阶段，次生壁加厚 的分子机制研究还相对较少。棉纤维次生壁加厚期(大约15．40DPA左右)是纤维比强 度形成的关键时期，研究次生壁加厚的分子机制，可为棉纤维次生壁加厚相关基因 的克隆奠定基础