昆虫激肽硫代类似物：合成、光致异构化以及构效关系研究-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

④激爹 ④激爹 判麟硕士研究生学位论文 ．1_ 原创性声明 本人郑重声明：本人所呈交的学位论文，是在导师的指导下独立 进行研究所取得的成果。学位论文中凡引用他人已经发表或未发表的 成果、数据、观点等，均己明确注明出处。除文中已经注明引用的内 容外，不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对 本文的研究成果做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式 标明。 本声明的法律责任由本人承担。 石乙√ 论文作者签名： 日期：矽。f·仂 缮葡整篓苎．鎏 缮葡整篓苎．鎏心．∥埘锄∞啊Il『璐ITY 兰州大学硕士研究生学位论文-2． 关于学位论文使用授权的声明 本人在导师指导下所完成的论文及相关的职务作品，知识产权归 属兰州大学。本人完全了解兰州大学有关保存、使用学位论文的规定， 同意学校保存或向国家有关部门或机构送交论文的纸质版和电子版， 允许论文被查阅和借阅；本人授权兰州大学可以将本学位论文的全部 或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用任何复制手段保存和 汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该论文直接相 关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为兰州大学。 保密论文在解密后应遵守此规定。 论文作者签名：蔓垒 导师签名： 圈 卅， 日 ◎戮鎏 ◎戮鎏 纠大学硕蝴究生学位论文 -1． 摘 要 昆虫激肽(Insect kinins)是一类以Phe．Xaa-Yaa-Trp—Gly—NH2为C末端的多 肽，其中Xaa可以是Tyr、His、Ser或Asn。Yaa可以是Ala，但通常是Ser或 Pro。生物活性研究表明，它具有促进昆虫马氏管扭动及其原尿分泌、调节血淋 巴量以及水盐平衡、对马氏管跨膜电位去极化、促进后肠收缩等作用。此外，还 发现昆虫激肽能抑制昆虫体内蛋白水解酶、脂肪酶等消化酶的释放、抑制幼虫增 长等。从结构上看，C端五肽Phe．Xaa．Yaa-Trp—Gly-NH2是保持活性所需的最小 片段，被称为核心五肽。构象研究表明，C端五肽中存在两种构象：1-4 3-转角 和2．5 D．转角。然而，其不确切的构效关系，大大阻碍了以其结构为模板的新型 害虫防治试剂的开发。 本文旨在通过引入可光致异构化的硫代酰胺键5f，【CS-N]，构建构象可控的昆 虫激肽类似物，用以阐明C端五肽H．Phe．Xaa．Yaa．Trp．Gly-NH2的活性构象。本 文描述了昆虫激肽硫代类似物H．Phe!-Tyf．If4CS-N]．Pr03-Trp4．GIy5-NH2 (研CS．州2-kinin)的合成；并用Uv—vis、CD、HPLC等方法对其光致异构化特性 进行表征。结果表明：与天然肽键仅一个原子差异的硫代酰胺键有光控开关的作 用：经254 nln紫外光照后，顺式研CS-N]含量由1 5．7％增加到47．7％，通过热弛 豫又下降至15。2％；热弛豫半衰期tl忍=40 min。对其在不同构象状态下的促蟑螂 后肠收缩活性研究显示：纠CS-N]2-kinin保留了母肽80％的最大活性，ECso=(4．1 ±0．2)×10。懈254 nm紫外光照而达到光稳定状态时，研CS-N]2-kinin的促后 肠收缩活性比未光照状态显著增强，ECso=(1．1±o．2)×10‘k经热弛豫后，其活 性又恢复到未光照水平，Ec50=(3．9±o．3)×10。：。以上实验证据表明，有利于形 J氓 成1-4 p．转角的顺式研CS．N]2-kinin是昆虫激肽类似物产生生理活性时的活性构 象。 关键词：昆虫激肽；硫代肽键；硫酰化；光致异构化：固相多肽合成；构象； 蟑螂后肠；马氏管；肌肉收缩活性；圆二色谱；构效关系 国 国 麓州夹鎏 兰州大学硕士研究生学位论文 -2 ≮夕 娴i勰呷疆rl暖bI玎 ABSTRACT The insect kinins share a highly conserved C—terminal pentapeptide sequence Phe．Xaa—Yaa-Trp-Gly—NH2，where Xaa can be Tyr，His，Ser or Asn，and Yaa can be Ala but is generally Ser or Pro．They have been isolated from a number of insects， including species of Dtyoptera，Lepidoptera，and Orthoptera．Structurally，the insect kinins require an intact C-terminal pentapeptide sequence for full bioactivity， which wa