雷公藤内酯醇调控树突状细胞的功能和抑制肿瘤细胞生长的实验研究-免疫学专业论文.docx

中文摘要雷公藤内酯醇调控树突状细胞的功能和抑制 中文摘要 雷公藤内酯醇调控树突状细胞的功能和抑制 肿瘤细胞生长的实验研究 摘 要 20世纪70年以来，卫矛科雷公藤属植物雷公藤(tripterygium wilfordii Hook．f．)的提取物，由于其独特的免疫调节，抗炎等药理作用逐步得到 人们的认识，在临床上广泛应用于类风湿性关节炎，系统性红斑狼疮， 移植排斥及哮喘的治疗。雷公藤内酯醇(triptolide，又称雷公藤内酯， 雷公藤甲素)是从雷公藤中提取出来的一种活性单体成分，是环氧二萜 内酯化合物。经研究证实，雷公藤内酯醇是雷公藤提取物中免疫抑制活 性最强的成分，大量的实验研究表明，雷公藤内酯醇在抗炎、免疫抑制 以及抗肿瘤方面都具有明显疗效，近几年来引起国内外医药界的广泛关 注。特别是其独特的抗肿瘤活性，使其成为一种很有发展前景的新型抗 癌药物。 抗原呈递细胞(antigen presenting cells，APC)主要承担对抗原物质 的摄取，加工，并将抗原肽呈递给特异性T淋巴细胞，是启动免疫应答 的关键因素。树突状细胞(dendritic cell，DC)是一种专职的抗原提呈细胞， 具有诱导初次免疫应答的独特功能。DC广泛分布于全身多个组织器官， 能有效刺激初始型T细胞的增殖功能，是机体免疫反应的始动者。这一 专职作用与其抗原加工和提呈功能及其成熟和迁移能力密切相关。受到 抗原刺激后，DC经由循环或淋巴系统迁移至二级淋巴器官，并在此将 抗原提呈给T细胞。DC是一类异质性细胞群体，具有不同的亚群和不 同的功能状态，不但在增强免疫反应上具有特别重要的作用，在诱导特 异性的免疫耐受中也具有重要作用。各种实验动物模型研究结果表明， DC在移植耐受的诱导中起关键作用，直接删除移植物中存在的DC，能 够明显延长移植物的存活时间。 p53基因的突变占实体瘤的50～70％，因而导致相对的化疗抵抗。TNF 家族成员如TNF．c【，Fas，和TRAIL(TNF．related apoptosis．inducing ligand，Ap02L)，对p53野生型或突变性的肿瘤细胞均有Ⅻ习亡诱导作用。 但遗憾的是，TNF．a诱导的凋亡由于激活NF．KB而受到限制，NF．KB的 中文摘要 中文摘要 激活可以引起促炎细胞因子的释放，因此对机体是有害的。已有文献报 道，雷公藤内酯醇能够通过抑制NF-KB的活化敏感TNF．0【诱导的肿瘤细 胞凋亡。另有报道雷公藤内酯醇单独作用对淋巴细胞瘤以及乳腺癌等实 体瘤亦有抑制作用。但是，雷公藤内酯醇能够诱导激活的T细胞凋亡。【目 的】本课题研究的目的有--：(1)从雷公藤内酯醇对树突状细胞功能影 响的角度探讨其抗炎及免疫抑制效用和机制；(2)雷公藤内酯醇体内外 抗肿瘤作用。主要探讨雷公藤内酯醇在非细胞毒的浓度范围内，单独或 与TNF．Ct联合作用是否能够诱导肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤生长作用。【方 竞幻(1)流式细胞术检测了DC表面分子的表达和趋化细胞因子受体表 达的变化；(2)RT．PCR方法检测了趋化细胞因子受体mRNA的表达： (3)ELISA方法检测了DC培养上清中细胞因子和趋化因子的分泌； (4)Transwell方法检测了细胞的趋化作用；(5)Hoechst 33258荧光 染色检测了细胞凋亡的形态学改变； Annexin V／PI染色方法检测了细胞 的凋亡，DNA凝胶电泳检测了DNA的片段化；(6)MTT实验和3H掺入 法检测了肿瘤细胞的增殖情况：(7)Western blot方法检测了某些蛋白的 表达。[结果】(1)雷公藤内酯醇对DC分化、发育过程中的表面标志 (CD40，CD80，CD86，Ia6)无明显影响，LPS刺激DC 24小时，上述 表面标志表达明显上调，表明DC分化发育为成熟的DC，需公藤内酯醇 处理后，并不抑制LPS诱导的DC表型的成熟；(2)雷公藤内酯醇明显 抑制LPS刺激的细胞因予TNF一0【，IL．邶，和II。一12p70的分泌，增加细 胞因子IL。10的产生；(3)MLR实验表明雷公藤内酯醇处理的DC抑制 异基因T细胞的共刺激活性；从一个方面表明雷公藤内酯醇能够抑制DC 的抗原呈递功能。(4)雷公藤内酯醇处理的DC经LpS刺激，明显抑制 某些趋化因子的产生(MIP—let，MIP一113 and MCP．1)，从而抑制了对CD4+ T细胞的趋化作用；(5)体外趋化实验表明雷公藤内酯醇能旧界抑制DC 向CCLl9(MIP3p)迁移，而维持对MIP．1et的作用；(6)RT．PCR、 Western blot和细胞内染色结果表明，雷公藤酯醇明显抑制LPS刺激的 CCR7的表达，对CCRl和CCR5的表达有轻微增强，对CxCR4亦有抑 制作用：(7)雷公藤内酯醇能够抑制LPS