联合免疫诱导大鼠肝移植免疫耐受的实验研究-外科学(普通外科)专业论文.docx

上海交通大学医学院2003级博士学位论文系间sD—SD大鼠肝移植100例，周种异体SD．Wistar大鼠肝移植80例。 上海交通大学医学院2003级博士学位论文 系间sD—SD大鼠肝移植100例，周种异体SD．Wistar大鼠肝移植80例。 并通过混合淋巴细胞培养反应(MLR)检测两个品系大鼠间的相容性。 结果：受体肝上下腔静脉吻合时间(12．34-1．7)分钟，门静脉吻合时间 (2．84-0．6)分钟，肝下下腔静脉吻合时间(2．44-0．5)分钟，无肝期(21．34-2．2) 分钟。肝移植术后6～7天SD—SD大鼠组合未见明显免疫排斥病理改变， SD—Wistar大鼠组合可见典型急性排斥反应。死亡的主要原因包括麻醉意 外、气胸、失血性休克、无肝期过长、下腔静脉栓塞、肺部感染、胆道 梗阻或移植肝无功能等。MLR中相对SD细胞的刺激指数(SI)高达 (100．54-7．6)，相对Wistar细胞的SI也高达(124．24-8．3)。结论：改良 Kamada法大鼠原位肝移植手术操作相对简便，术后生存率高、并发症少。 SD—Wistar大鼠肝移植属高排斥组合动物模型，且价廉、易得。 第二部分联合免疫治疗对大鼠生存期和肝功能的影响 目的：采用抗CD一40L单抗加小剂量CsA(伴或不伴DSBT)的联合免 疫治疗，观察其对大鼠肝移植受体生存时间和肝功能的影响。方法：在 建立稳定大鼠肝移植模型的基础上，将整个实验分为五组。A组(同基 因对照组)：SD—sD；B组(同种异体基因免疫排斥组)：SD---，Wistar， 不用任何治疗措施；C组：SD---+Wistar，CsA应用dl～d5；D组： SD-+Wistar，CsA应用dl～d5加抗CD一40L(CD一154)单抗应用d0、d2： E组：D组+供体特异性输血(DSBT)。观察各组大鼠肝移植受体生存时 间和肝功能的变化。结果：A组、D组、E组受体大鼠均可长期存活，B 组生存时间仅为(13．84-2．4)d。除A组以外，其余各组的术后ALT、总胆 上海交通大学医学院2003级博士学位论文红素、总胆汁酸均有不同程度升高，尤以B组和c组更为显著。D组和 上海交通大学医学院2003级博士学位论文 红素、总胆汁酸均有不同程度升高，尤以B组和c组更为显著。D组和 E组各项肝功能指标较A组有较明显升高，但与B、C两组相比升高幅 度要小得多。结论：抗CD一40L单抗加小剂量CsA(伴或不伴DSBT) 联合免疫治疗，可有效延长大鼠肝移植受体的生存时间，改善肝功能。 第三部分大鼠移植肝组织学及外周血Thlfrh2细胞因子谱变化分析 目的：观察联合免疫治疗后移植肝排斥反应的发生，并探讨Thl／Th2细 胞因子谱变化在移植免疫耐受诱导中的作用。方法：实验分组：同第二 部分，每组6只大鼠。各组大鼠在移植后第7天获取移植肝和外周血标 本，行移植肝病理组织学检查，并用ELISA法检测外周血细胞因子水平。 结果：B、C组病理组织切片可见中～重度急性排斥反应，肝内炎细胞浸 润较为明显，主要集中在汇管区。D组移植肝内组织损伤程度显著减轻， E组的镜下改变类似。A组基本无排斥反应。IL-2、IFN一丫在B组的血 清水平显著高于其余各组(P0．05)，TNF-旺在B组的表达水平高于不 同免疫抑制组，但差异无显著统计学意义。IL一4、 IL一10较A组均有所 增加，尤其D组和E组的IL一10的表达水平较B组显著增高(P0．05)。 结论：联合免疫治疗可有效抑制大鼠肝移植急性排斥反应。Th2类细胞 因子的高水平表达与诱导移植耐受、抑制排斥反应有重要关联，有助于 大鼠肝移植受体和移植肝的长期存活。 第四部分大鼠移植肝内Kupffer细胞分离及对T细胞增殖的抑制效应 目的：建立分离、纯化和培养大鼠肝脏KC的方法，并观察KC对同种 上海交通大学医学院2003级博士学位论文反应性T细胞增殖的影响。方法：采用在体原位肝脏灌注结合密度梯度 上海交通大学医学院2003级博士学位论文 反应性T细胞增殖的影响。方法：采用在体原位肝脏灌注结合密度梯度 离心技术，进行大鼠肝脏KC分离、纯化和培养。在体外实验中进一步 观察KC在MLR体系中对同种反应性T细胞增殖程度的影响。结果： KC得率为(1．14-0．2)x107／肝，平均存活率为(93．5+1．8)％，纯度三90％， ED．2f+)。培养24小时可见大量细胞伸展生长，呈现典型的星形或多边 形。在MLR体系中加入未经辐照的KC后，反映T细胞增殖程度的cpm 值明显降低，且D、E两组所获得的KC对T细胞增殖有着更为明显的 抑制作用。结论：本实验成功建立了分离、纯化和培养大鼠KC的方法。 KC对同种反应性T细胞增殖具有抑制作用，尤其从接受联合免疫治疗 后长期存活受体大鼠所获得的KC抑制作用更为明显。