2020年高考生物一轮复习讲义：选修3 第十单元 第35讲 基因工程 .docVIP

第35讲　基因工程 [考纲明细]　1.基因工程的诞生(Ⅰ)　2.基因工程的原理及技术(含PCR技术)(Ⅱ)　3.基因工程的应用(Ⅱ)　4.蛋白质工程(Ⅰ)　实验：DNA的粗提取与鉴定 知识自主梳理 一、基因工程的概念及基本工具 1．基因工程概念 2．DNA重组技术的基本工具 (1)限制性核酸内切酶(简称：eq \o(□,\s\up3(07))限制酶) ①来源：主要是从eq \o(□,\s\up3(08))原核生物中分离纯化出来的。 ②作用：识别双链DNA分子的某种特定的eq \o(□,\s\up3(09))核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的eq \o(□,\s\up3(10))磷酸二酯键断开。 ③结果：产生eq \o(□,\s\up3(11))黏性末端或eq \o(□,\s\up3(12))平末端。 例：如下图所示，EcoRⅠ限制酶识别的碱基序列是eq \o(□,\s\up3(13))—GAATTC—，切割位点在eq \o(□,\s\up3(14))G和A之间；SmaⅠ限制酶识别的碱基序列是eq \o(□,\s\up3(15))—CCCGGG—，切割位点在eq \o(□,\s\up3(16))C和G之间；说明限制酶具有eq \o(□,\s\up3(17))特异性。 ④本质：蛋白质。 [深入思考]　限制酶为何不切割自身DNA? 提示　限制酶具有特异性，即一种限制酶只能识别一种特定的碱基序列，并在特定的位点上进行切割；限制酶不切割自身DNA的原因是自身DNA中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。 (2)DNA连接酶 ①作用：将限制酶切割下来的DNA片段eq \o(□,\s\up3(20))拼接成新的DNA分子。恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的eq \o(□,\s\up3(21))磷酸二酯键。 ②类型 ③DNA连接酶和限制酶的关系 (3)载体 ①载体的作用：携带外源DNA片段进入受体细胞。 ②常用载体：eq \o(□,\s\up3(26))质粒。其他载体：λ噬菌体衍生物、eq \o(□,\s\up3(27))动植物病毒等。 ③质粒 a．概念：质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌eq \o(□,\s\up3(28))拟核DNA之外，并具有自我复制能力的很小的双链eq \o(□,\s\up3(29))环状DNA分子。 b．特点：能自我复制；有一个至多个eq \o(□,\s\up3(30))限制酶切割位点；有特殊eq \o(□,\s\up3(31))标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。 二、基因工程的基本操作程序 1．目的基因的获取 目的基因：主要指eq \o(□,\s\up3(01))编码蛋白质的基因，也可以是一些具eq \o(□,\s\up3(02))调控作用的因子。 (1)从基因文库中获取 ①前提条件：eq \o(□,\s\up3(06))目的基因序列未知。 ②基因文库：将含有某种生物不同基因的许多eq \o(□,\s\up3(07))DNA片段，导入受体菌的群体中eq \o(□,\s\up3(08))储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，可分为eq \o(□,\s\up3(09))基因组文库和eq \o(□,\s\up3(10))部分基因文库(如cDNA文库)。 ③构建过程 (2)利用PCR技术扩增目的基因 ①PCR含义：是一项在生物体外eq \o(□,\s\up3(18))复制特定DNA片段的核酸合成技术。 ②PCR原理：DNAeq \o(□,\s\up3(19))双链复制。 ③前提条件：有一段已知目的基因的eq \o(□,\s\up3(20))核苷酸序列，以便根据这一序列合成eq \o(□,\s\up3(21))引物。 ④要求 模板：eq \o(□,\s\up3(22))目的基因两条链。 原料：四种脱氧核苷酸。 酶：热稳定eq \o(□,\s\up3(23))DNA聚合酶(eq \o(□,\s\up3(24))Taq酶)。 引物：人工合成的两条eq \o(□,\s\up3(25))DNA片段(引物1，引物2)。 ⑤PCR反应过程 ⑥方式：指数形式扩增(2n，n为扩增循环的次数)。 ⑦结果：eq \o(□,\s\up3(32))短时间内大量扩增目的基因。 (3)人工合成 ①前提条件：核苷酸序列eq \o(□,\s\up3(33))已知，基因eq \o(□,\s\up3(34))比较小。 ②方法 a．反转录法：目的基因的mRNAeq \o(――→,\s\up17(反转录))eq \o(□,\s\up3(35))单链DNAeq \o(――→,\s\up17(合成))双链DNA(目的基因) b．化学合成法：蛋白质的氨基酸序列eq \o(――→,\s\up17(推测))eq \o(□,\s\up3