淋巴瘤p16基因甲基化状态及其逆转的研究-肿瘤学专业论文.docxVIP

淋巴瘤p16基因甲基化状态及吴逆转的研究中文．考商要 淋巴瘤p16基因甲基化状态及吴逆转的研究 中文．考商要 ，P16基因，又称多肿瘤抑制基因(Multiple tumor suppressor， MTsl)，定位于9p21，编码产物p16蛋白可以抑制细胞周期素 D1(Cyclin D1)与细胞周期素依赖性蛋白激酶(Cyclin dependent kinase，CDK)复合物的活性，使Rb蛋白的磷酸化受阻，细胞周 期发生GI／S期阻滞。研究发现，细胞周期的调节因素中，p16基 因是肿瘤中最常发生改变的、通过两次缺失事件频繁失活的抑癌 基因。而且，作为细胞周期G，期检查点相关基因的一种，其表 达水平的异常与肿瘤的发生及进展机制有关，并可能成为新的判 断肿瘤生物学行为和患者预后的指标。 淋巴瘤是具有高度异质性的恶性肿瘤，病理诊断困难，病因 及发病机制尚未明了，治疗上也存在不敏感或耐药等问题。目前 的研究发现，在白血病．淋巴瘤细胞系中P16基因的失活是一个 频发事件，失活机制有等位缺失、非等位缺失、点突变、重排及 启动子区高度甲基化等。其中，等位缺失及甲基化的发生频率较 高。但是迄今为止，有关淋巴瘤组织中p16基因异常状态与其 临床病理指标的联系及意义的研究仍不多见，认识上也不统 一。另外，尚无p16基因高甲基化状态的逆转与淋巴瘤细胞株 对化疗药物敏感性关系的研究报道。’ 本文应用免疫组织化学、细胞生物学及分子生物学等技术和 方法，探讨淋巴瘤组织和细胞中p16基因的异常情况，p16基因 转录及蛋白表达的情况，了解P16基因异常在淋巴瘤中的发生率 及其与淋巴瘤恶性程度的关系，并在体外研究中观察了DNA甲 基化抑制剂5．氮杂．2’．脱氧胞嘧啶(5．aza．2-deoxycytidine，5． AzaCdR)对p16基因高甲基化状态的逆转及这种逆转效应对淋 巴瘤细胞株药物敏感性的影响。全文共分三个部分： 第一部分淋巴瘤中p16蛋白的表达及其 临床病理相关性， 目的、研究淋巴瘤石蜡标本中的p16蛋白表达情况，同时检测Rb 蛋白的表达，了解p16蛋白的失表达频率与淋巴瘤病理类型的相 上海医科大学 博士论文 1 淋巴瘤pi6基因甲墨化状态及真逆转的研究关性；淋巴瘤中p16蛋白与Rb蛋白表达之间的关系。 淋巴瘤pi6基因甲墨化状态及真逆转的研究 关性；淋巴瘤中p16蛋白与Rb蛋白表达之间的关系。 i方法应用单克隆抗体、免疫组织化学Envision法，检测183例 淋巴瘤石蜡标本中p16蛋白的表达，其中的68例同时检测Rb 蛋白的表达。9例反应性增生的淋巴结组织作为对照组研究。 结果(1)183例淋巴瘤标本中，p16蛋白的失表达可见于47，0％ (86／183)的淋巴瘤病例，B-NHL、T-NHL及IlL中的p16蛋白 失表达率分别为47．6％(49／103)、53．3％(24／45)及37．1％(13／35)。 f2)在同时检测p16及Rb蛋白的68例标本淋巴瘤中，二者的失 表达分别为48．5％(33／68)及35．3％(24／68)。B．NHL、T—NHL与m 中P16及Rb蛋白的失表达率分别为50．0％(20／40)及40．0％ (16／40)、50．O％(6／12)及33．3％(4／12)、43．8％(7／16)及25．O％ (4 716)。P16及Rb蛋白同时失表达见于23例，其中1例为套 细胞淋巴瘤(MCL)，15例为弥漫性大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)， 3慨为T淋巴母细胞性淋巴瘤(T．LB)，另有4例IlL。(3)反应 性增生的淋巴结组织均未见p16及Rb蛋白失表达。(4)统计学 分析，滤泡性淋巴瘤(FL)与DLBCL、FL的I级与1I级及B-NHL 与HL之间的P16失表达有显著性差异(P0．05)。≥ 结论(1)恶性淋巴瘤中p16蛋白的失表达率较高，与p16蛋白 密切相关的Rb蛋白也有一定比例的失表达。(2)p16及Rb蛋白 的失表达仅见于恶性淋巴瘤组织，在反应性增生的淋巴结组织中 则不出现：p16及Rb蛋白的失表达在淋巴瘤的发生、发展过程 中可能有协同作用。f3)P16蛋白的失表达与淋巴瘤的恶性程度 相关，一定程度上可以作为淋巴瘤预后判断的一个指标。 关键词淋巴瘤p16蛋白Rb蛋白免疫组织化学 第二部分淋巴瘤中p16基因异常的研究 目的、研究淋巴瘤组织中p16蛋白失表达的主要基因机制，观察 p16基因异常及p16基因表达的异常、基因异常与表达异常以及 与淋巴瘤恶性程度的关系。 ／方法选用新鲜的淋巴瘤组织，应用PCR扩增方法检测P16基因 的纯合性缺失；应用限制性内切酶相关的PCR甲基化分析检测 P16基因的甲基化；应用RT．PCR检测P16基因mRNA的表达。 结果f1)68例淋巴瘤新鲜组织中，P16基因缺失12例，其中外