六味地黄丸含药血清对肝癌自杀基因治疗旁杀伤的增效作用-中西医结合基础专业论文.docxVIP

在GCV为9．8 在GCV为9．8 u M、19．6 u M浓度下，CBRH7919／tk。细胞平均存活率为79．34％、 76．64％；而CBRH7919／tk+细胞只有48．73％、43．84％(--者无显著性差异)；Gcv为 39．2 u M、78．4 p M时，CBRH7919／tk。细胞平均存活率为73．67％、68．05％；而 CBRH7919／tk+细胞只有27．06％、17．49％。鉴于在进行HSV-tk增效药物实验时要尽量 避免GCV对tk。细胞的杀伤作用，同时考虑到大鼠血清对CBRH7919细胞的营养作用以 及血清对药物的干扰作用(大鼠血清可干扰GCV对细胞的抑制作用，对细胞起保护作 用)，故选择39．2pM的GCV作为工作浓度。 L 2血清的制各及含药血清的添加量 本实验给药方案采用每天灌胃2次，间隔8小时；灌胃后1h取血。从MTT以及 流式的观察结果来看，灌胃八天组的含药血清其效果要好于四天组的血清。 对照血清及六味地黄丸含药血清在5％～lo％浓度下对大鼠肝癌细胞CBRH7919的 生长有促进作用，但是随着血清浓度增高(2096)会对细胞的生长产生明显的抑制作 用，镜下观察细胞形态发生空泡状改变。说明大鼠血清本身对肝癌细胞有促生长作用。 但六味地黄丸含药血清与对照血清对细胞影响无统计学差异(P0．05)． 1．3 HSVI-tk／GCV治疗中tk*：tk-细胞最佳比例的筛选 实验证明：1096tk+混合比例下药物可作用空间比较大，有利于观察含药血清对旁 杀伤效应的诱导促进作用。 1．4六味地黄丸含药血清对tk．／Gcv系统旁杀伤增效作用的量效关系 四天含药血清与八天含药血清均能增强HSVl一tk／GcV系统大鼠肝癌细胞 CBRH7919的旁杀伤效应，但是其增效作用的时间点是不同的：四天血清孵育6h能观 察至B二者联合杀伤的协同增效作用；八天血清孵育24h能观察到二者联合杀伤的协同 增效作用。 2六味地黄丸含药血清对HSV-tk／GCV系统旁杀伤增效机制的研究结果 2．1六味地黄丸含药血清联合tkVGCV系统对CBRH7919细胞周期和凋亡的结果 无论是PI单染色法还是Annexin v／PI双染色法，六味地黄丸含药血清与 HSVI—tk／GCV治疗系统联用，都可增加大鼠肝癌细胞的凋亡率．且八天含药血清的药 效要稍好于四天血清。 PI单染色法：八天血清——含药血清+lO％tk+GCV组的凋亡率比对照血清 +10％tk++GCV组的提高了0．77％；四天血清——啥药血清+lO％tk砌组的凋亡率比对 照血清+IO％tk％GCV组的提高了0．11％。当存在lO％tk时，Gcv／含药血清使细胞的S 期比率显著的比tkIGCVl含药血清提高近一倍(八天血清)。表示GCV杀伤的细胞增 殖加速，但是药物血清未见明显抑制增殖的作用． hnnexinv／PI双染色法：八天血清——含药血清+lO％tk++GCV组的凋亡率比对照 血清+lO％tk++GCv组的提高了6．096；四天血清——含药血清+lO％tk++GCV组的凋亡率 比对照血清+IO％tk+GCV组的提高了5．7％。 Ⅱ 2．2六味地黄丸含药血清对CBRH7919细胞的缝隙连接机制初探结果 2．2六味地黄丸含药血清对CBRH7919细胞的缝隙连接机制初探结果 CBRH7919细胞经过六味地黄丸含药血清孵育后，细胞间隙连接通讯功能较对照血 清孵育后的获得显著增强．但八天含药血清与四天含药血清相比无明显差异． 结论：本研究在细胞水平探讨了六味地黄丸含药血清增强自杀基因疗法疗效的可 行性．发现能有效增强自杀基因对肿瘤细胞的杀伤力，提高旁杀伤效应，而且是协同 性增效作用．对其机制研究分析表明，其作用机制很可能是通过增强CBRH?919细胞 的GJIC或诱导凋亡等来起到增效作用的，也可能是两个机制都起作用。 关键词肿瘤；肝癌；HSVI-tk基因；六昧地黄丸；血清药理学；缝隙连接 HI The The Enhancing Effect of Serum PharmacoIogy of LiuweiDiduang BoIus on‘‘Bystander Effect’’of Suioide Gene Therapy of Liver Cancer Special ity：Integration of Chineso and Western ged；cino Basis Author：Zhang Ai juan Tutor：Prof．Du Biaoyan ABSTRACT ne malignant tumor is the disease ofendaageriag the humaa health badly．Primary liver cancer is one