课件：精液冷冻概述.pptVIP

* 精液研究的新进展 玻璃化低温保存 最理想化的精液保存方法。指在溶液降温过程中，相变后直接转变为非晶态（玻璃态）的固态。由于玻璃态分子间的关系和液态没有明显变化，可避免冰晶形成过程中对细胞的损伤。要形成玻璃态必须有两个条件：有极大的冷却速率；极大增加溶液的浓度。 * 精液研究的新进展 冷冻损伤的新理论： 活性氧（ROS）的损伤： 精液冷冻过程中产生较多的活性氧，特别是标本中白细胞含量较高时。从样本中除去白细胞或冷冻前用抗氧化剂处理，可以提高精子的活力和功能。 膜穿透性： 不同保护剂成分对细胞膜的穿透性，水对细胞膜的穿透性，它们的大小决定了冷冻保护剂与精液混合时平衡的时间及降温速率。穿透性越大的冷冻保护剂可以得到较高的冷冻复苏率。 * 精液研究的新进展 冷冻保护剂渗透压 冷冻保护剂渗透压的大小也是导致精液冷冻损伤的主要因素之一。冷冻保护剂渗透压2000mOsm时大部分细胞膜会受到破坏。这一损伤同时也与细胞本身可以承受渗透压变化的程度，在冷冻和复温过程中，如果渗透压变化超过细胞本身承受能力，严重的细胞将死亡。 冷打击 精子从室温降到0℃时会受到损伤，我们称之为冷打击。它往往决定于精子本身抗冷打击的能力。 * 本精子库冷冻试验进展 已建立合理的精液冷冻程序 共进行精液冷冻试验169例，平均复苏率达62.6％ 随着条件不断的摸索，冷冻复苏率也在不断地提高； 已建立比较稳定的精液冷冻方法，冷冻复苏率完全满足卫生部的要求。 * 精液冷冻研究的方向 寻找更加适合精液冷冻的冷冻保护剂； 探讨渗透压对精液冷冻产生的影响； 活性氧（ROS）对精液冷冻产生的影响及应对方法； 根据冷冻保护剂选择各个降温区最佳降温速度； * * 返回 * 返回 * 2003.12～2004.03本精子库每月精液冷冻平均复苏率 返回 THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 * 四川大学华西第二医院人类精子库 四川大学华西第二医院人类精子库 四川大学华西第二医院人类精子库 四川大学华西第二医院人类精子库 四川大学华西第二医院人类精子库 四川大学华西第二医院人类精子库 四川大学华西第二医院人类精子库 四川大学华西第二医院人类精子库 四川大学华西第二医院人类精子库 四川大学华西第二医院人类精子库 四川大学华西第二医院人类精子库 四川大学华西第二医院人类精子库 可编辑 四川大学华西第二医院人类精子库 可编辑 精液冷冻技术概述 四川大学华西第二医院人类精子库 * 精液冷冻历史回顾 1776年Spallanzani偶然发现将人精液埋藏于冰雪仍可存活 1886年Mantegazza发现在－15℃下的精子可以存活较长时间； ???? 1937年Jannel报告人类精子可在-196℃中存活； ???? 1949年Polge首先发现甘油对冷冻精子具有特殊保护作用。 * 冷冻精液的临床意义 供者人工授精（AID）使用方便，并且可以配合女性生殖周期进行； 对有先天遗传疾病和严重传染性疾病的患者可以使用； 进行生殖保险；如男性绝育手术者，肿瘤患者化疗前，从事危险行业者等； 对于少、弱精症者，可多次采集冷冻后加以浓缩； 对于取精困难和梗阻性无精症的患者在ICSI治疗时，用冻融精子代替新鲜精子可避免反复抽吸睾丸或附睾，利于医患双方掌握治疗进度。 * 冷冻损伤原理 冰晶损伤学说 ice crystal damage 溶液效应学说 solute damage * 冷冻原理 降温过程分期： 温度休克期RT~5℃ 潜热扩散期5～0℃ 冰晶形成期0～－15℃ 再结晶期－15～－79℃ 保存期－80～－196℃ * 冷冻损伤原理 精子 示意图： 精子细胞外 冰晶形成 胞内冰晶形成 细胞脱水 冰晶损伤 溶液损伤 降温 快速 慢速 * 冷冻对精子产生的损伤 超微结构的损伤： 冷冻复温后的精子外膜变薄，波浪状改变或破损，胞浆、顶体内和线粒体内透光度增加，顶体增宽，线粒体外形变圆，轴丝增粗，提示细胞肿胀是形态改变得主要征象。 精子功能： 日本学者研究根据精子顶体功能和穿透率无显著变化，发现冷冻精子授精能力无下降。 染色体： 目前对冷冻保存精子染色体自然畸变率报道不多，仍存在争论 * 冷冻保护原理 冷冻保护液 渗透性 增加细胞内外的渗透压，降低细胞内外液的冰点，减少冰晶的形成。 非渗透性 调节PH，细胞外渗透压，增加营养 不同温区最适的冷冻速率 研究表明过快或过慢的降温都是不合适的，应根据不同的冷冻保护剂选择各个温区最佳的降温速度。目前还未找到。