实验3 琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制的观察.pptVIP

实验三、琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制的观察 Contents 实验原理 实验原理 根据这种蓝色转变为无色的变化过程，就可以判断出琥珀酸脱氢酶起了催化作用。 丙二酸的结构与琥珀酸相似，可与琥珀酸竞争性结合琥珀酸脱氢酶的活性中心，从而抑制该酶的活性，是琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂。这种抑制作用即属酶的竞争性抑制作用. 由于甲烯白容易被空气中的氧所氧化，所以实验需在无氧条件下进行。例如，用液体石蜡(或琼脂)封闭反应液，可以制造无氧环境。 实验试剂 Diagram 实验步骤（1）猪心脏提取液的制备 实验步骤 实验原理 注意事项 Company Logo * 上节课遇到的小问题： 加热至沸时淀粉的螺旋结构完全破坏，蓝色便消失。一旦冷却螺旋结构恢复，蓝色重新呈现。 实验原理 实验试剂及仪器 实验步骤及注意事项 1 2 3 琥珀酸脱氢酶是位于动物细胞线粒体内膜上的一种氧化酶，它直接与电子传递链相连，是呼吸链的标志酶，亦即线粒体或细胞内三羧酸循环的一种标志酶。 在体内，该酶可使琥珀酸脱下的氢进入FADH2呼吸链，通过一系列传递体最后传递给氧而生成水。当在缺氧的条件下可用甲烯蓝(蓝色物质)作为受氢体时,甲烯蓝被氢还原成甲烯白(无色物质),其反应如下： 1. 1.5%(m/V)琥珀酸钠溶液 2. 1%(m/V)丙二酸钠溶液 3. 0.02%(m/V)甲烯蓝溶液 4. 1/15mol/L Na2HPO4溶液 5. 液体石蜡油、洗净的石英砂 实验器材 剪刀 研钵 恒温 水浴锅 离心机 1 称取新鲜猪心脏2g放置研钵中剪碎。（2个组做一份，每个实验台的偶数组配平离心） 2 加入等体积的石英砂和1/15mol/L Na2HPO4溶液8ml（4g总共加），然后将之研磨成匀浆。（加足够石英砂，研磨要充分。） 3 再加入1/15mol/L Na2HPO4溶液12ml （ 4g总共加），充分混匀。 4 于2000rpm离心10min，取上清备用。（一定要将钢套和离心管套在一起配平，全班一起离心！） （2） 取4支试管，按下表操作 。 （3） 加好试剂后混匀，然后立即在各试管中加入一层（1 - 1.5cm高）液体石蜡油。 （4） 将各管置37℃恒温水浴锅中保温，30min内观察各管颜色的变化。 比较颜色变化的速度，并试分析其原因。然后将第1支试管用力振摇，观察有何变化，观察并解释之。 注：煮沸至心脏制备液自身沸腾5 min即可。 1 剪下的心脏组织须在天平上称量，研磨应充分至糊状，使琥珀酸脱氢酶尽量释放到溶液中。 2 滴加试剂时，尽量将各管的试剂加完全，最后再滴加心脏制备液。观察颜色变化时，应轻拿轻放，剧烈的振荡会使空气进入，造成试验失败。 3 离心时，注意连同套筒在内的离心管一定要精确平衡，并将重量相同的离心管对称放置，以免产生的离心力不对称而损坏离心轴，造成严重事故。 Company Logo