临床分离志贺菌质粒介导喹诺酮类耐药基因的检测及其与β-内酰胺酶、16SrRNA甲基化酶和整合子基因的相关性研究内科学(传染病)专业论文.docxVIP

安徽医 安徽医科大学硕士学位论文 综述44 参考文献49 PAGE PAGE 1 缩 略 词 表 英文简称 英文全称 中文全称 E. coli Escherichia coli 大肠埃希菌 ATCC American type culture collection 美国模式培养物收藏所 MIC Minimal inhibitory concentration 最低抑菌浓度 AMP Ampicillin 氨苄西林 CTX Cefotaxime 头孢噻肟 FOX Cefoxitin 头孢西丁 CAZ Ceftazidime 头孢他啶 CRO Ceftriaxone 头孢曲松 CEF Cefepime 头孢吡肟 NA Nalidixic acid 萘啶酸 CIP Ciprofloxacin 环丙沙星 LVX Levofloxacin 左氧氟沙星 GAT Gatifloxacin 加替沙星 NFXL Norfloxacin 诺氟沙星 GM Gentamicin 庆大霉素 AMK Amikacin 阿米卡星 TET Tetracycline 四环素 CHL Chloramphenicol 氯霉素 SMZ Trimethoprim-sulphamethoxazole 复方新诺明 IMP Imipenem 亚胺培南 QRDR Quinolone resistance determining region 喹诺酮耐药决定簇区 PMQR Plasmid-mediated quinolone resistance 质粒介导喹诺酮类耐药 PFGE Pulsed-field gel electrophoresis 脉冲场凝胶电泳 CLSI Clinical and Laboratory Standard Institute 美国临床及实验室标准 委员会 临床分离志贺菌质粒介导喹诺酮类耐药基因的检测及 其与 β-内酰胺酶、16S rRNA 甲基化酶和整合子基因的 相关性研究 中文摘要 目的 了解安徽省临床分离志贺菌质粒介导喹诺酮类耐药基因的种类、分布以及对 抗菌药物的耐药性。 研究临床分离志贺菌质粒介导喹诺酮类耐药基因与 β-内酰胺酶、16S rRNA 甲基化酶和整合子基因的相关性。 材料与方法 菌株来源 收集安徽省 31 家医院 2007 年 9 月至 2010 年 10 月临床标本中分离的无重复 志贺菌共 137 株。药敏试验质控菌大肠埃希菌 ATCC25922，接合实验受体菌耐叠 氮钠的大肠埃希菌 J53AzR。 方法 用煮沸法提取细菌总 DNA，碱裂解法提取质粒。用聚合酶链反应(PCR)方法 扩增质粒介导喹诺酮耐药(PMQR)基因。PCR 产物纯化测序，结果至 Genbank 进行 比对，以明确质粒介导喹诺酮类耐药基因的基因型。 用 PMQR 基因阳性菌株与 E. coli J53AzR 行转移接合试验；采用琼脂倍比稀释 法对野生株、受体菌与接合子进行最低抑菌浓度(MIC)测定。 用质粒介导喹诺酮耐药基因阳性菌株的总 DNA 为摸板，PCR 技术扩增喹诺 酮耐药决定区(QRDR)相关序列、β-内酰胺酶、16S rRNA 甲基化酶和整合子基因。 对 PCR 产物进行测序，结果至 GenBank 进行比对，以明确基因型。然后用接合子 的质粒 DNA 为摸板，PCR 扩增 β-内酰胺酶、16S rRNA 甲基化酶和整合子基因， 验证这些耐药基因是否同时发生转移。 PAGE PAGE 3 采用脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis，PFGE)分析质粒介导喹诺 酮耐药基因阳性菌株的同源性。 结果 137 株志贺菌中检出 10 株(7.3%)质粒介导喹诺酮耐药基因阳性菌株。4 株 (2.9%)qnr 基因阳性菌株，其中 1 株携带 qnrB4 基因，3 株携带 qnrS2 基因(全序列 在 GenBank 的注册号分别为：HQ917003、JF261185)。另外检出 5 株(3.6%)菌株携 带 aac(6?)-Ib-cr 基因(全序列在 GenBank 注册号为 JF261186)和 1 株(0.7%)携带 qepA 基因。10 株 PCR 扩增阳性的菌株中有 6 株转移接合成功。接合子与受体菌相比， 对喹诺酮类等抗菌药物的 MIC 值均有不同程度的提高。 10 株 PMQR 基因阳性菌株中，7 株发生 gyrA 第 83 位氨基酸改变(Ser83→Leu)， 2 株发生 gyrA 第 87 位氨基酸改变(Asp→Tyr 或 Asp→Asn)，6 株发生 parC 第 80 位氨基酸改变(Ser80→Ile)；9 株 PMQR 基因阳性的菌株携带 β-内酰胺酶基因，其 中 7 株携带 b