六价铬对大鼠肝细胞线粒体呼吸链电子漏的影响研究-卫生毒理学专业论文.docxVIP

原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究 原创性声明 本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究 工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢 的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不 包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我 共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。 、作者签名：堑陋日期：卫让月』 学位论文版权使用授权书．．． 本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校 有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文， 允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内 容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科 学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》， 并通过网络向社会公众提供信息服务。 日期：皿年上月盐日 硕士毕业论文 硕士毕业论文 中文摘要 六价铬对大鼠肝细胞线粒体呼吸链电子漏的影响研究 中文摘要 目的： 确定适用于线粒体功能活性试验研究的线粒体提取方法，并初步 探索Cr(VI)诱导大鼠肝细胞线粒体呼吸链电子漏增加的机制，为阐明 Cr(VI)诱导肝细胞氧化损伤的机制提供线索。 方法： 分别用蔗糖法和试剂盒法提取大鼠肝细胞线粒体，用OPTEC光 学显微镜和H．600透射电子显微镜观察线粒体形态结构和超微结构。 用960MC荧光分光光度计和Clark氧电极测定线粒体提取0．5h、1．5h 和2．5h后的线粒体膜电位，ST3，ST4及呼吸控制率。用SP．756P可 见分光光度计测定线粒体及其他亚细胞器特异性标志酶的酶比活性。 分别以谷氨酸／苹果酸和琥珀酸为呼吸底物，启动线粒体主呼吸链和 次呼吸链的电子传递。测定不同浓度的Cr(VI)对肝细胞线粒体呼吸链 ROS生成量的影响。用Clark氧电极测定肝细胞线粒体主呼吸链和次 呼吸链的基础呼吸速率。线粒体悬液用Cr(VI)，GSH和各种复合体 抑制剂处理。其中，线粒体主呼吸链电子传递用Rot，DPI和Ant单 独或联合处理，而线粒体次呼吸链电子传递用Rot，DPI，TTFA和 Ant单独或联合处理。用VarioskanFlash 4．00．52多功能酶标仪分别测 定各组线粒体主呼吸链和次呼吸链02。-和ROS的生成量。 结果： 1．蔗糖法提取的线粒体膜电位和呼吸控制率显著高于试剂盒 法，差异有统计学意义(户O．05)。两种方法提取的线粒体标志酶的 纯化倍数没有统计学差异(尸O．05)。两种方法提取的线粒体超微结 构均完整，未见肿胀或损伤，但试剂盒法提取的线粒体纯度较差，可 见大量泡状体。 2．Cr(VI)在O．100uM的浓度范围内，能诱导肝细胞线粒体主呼 吸链和次呼吸链ROS的生成量随着Cr(VI)浓度的增加而增加，差异 有统计学意义(尸O．05)。线粒体次呼吸链的基础呼吸速率大于主呼 吸链的基础呼吸速率，差异有统计学意义(PO．05)。 3．以谷氨酸／苹果酸为呼吸底物时，与对照组相比，Rot组， 硕士毕业论文 硕士毕业论文 中文摘要 Rot+Ant组和DPI+Ant组的ROS含量和电子漏增加，Rot+DPI组和 Ant组ROS含量增加，DPI组的ROS含量降低(尸O．05)。与Cr(VI) 组相比，Cr(VI)+Rot组，Cr(Ⅵ)+Am组，Cr(VI)+Rot+DPI组， Cr(V11)+Rot+Ant组和Cr(VI)+DPI+Amt组的ROS含量和电子漏增加， Cr(VI)+DPI组ROS含量增加(尸O．05)。 4．以琥珀酸为呼吸底物时，与对照组相比，Rot组，DPI组， Rot+DPI组，Rot+TTFA组和DPI+TTFA组ROS含量和电子漏降低， W陌A组，Ant组，Rot+Ant组，Rot+DPI组和TTFA+Ant组的RQS 含量和电子漏增加，Rot+TTFA组的ROS含量降低(尸O．05)。与 Cr(VI)组相比，Cr(VI)+Rot组，Cr(VI)+DPI组和Cr(VI)+Rot+DPI组的 ROS含量没有统计学差异(尸O．05)。Cr(VI)+TTFA组和 Cr(VI)+Rot+TTFA 组， Cr(V／)+Ant组， Cr(VI)+Rot+Ant 组， Cr(WI)+DPI+Ant组和Cr(V1)+1]陌A+Ant组ROS生成量和电子漏增 加，Cr(VI)+DPI+TTFA组减少(尸O．05)。 结论： 1．蔗糖法提取的线粒体，与试