六价铬诱导L-02肝细胞凋亡及其机理研究-劳动卫生与环境卫生学专业论文.docxVIP

六价铬诱导L-02肝细胞凋亡及其机理研究 六价铬诱导L-02肝细胞凋亡及其机理研究 摘要 目的：在体外试验系统，探讨六价铬(hexavalent chromium，Cr (Ⅵ))对L．02肝细胞凋亡的影响及其作用机制。 方法： 用L-02肝细胞为受试细胞，通过MTI试验检测Cr(VI) 对L．02肝细胞存活率的影响，在70％细胞存活率的浓度下设置5 个试验组即3Ⅳmol／L、似mol／L、嘶mol／L、1矩mol／LCr(VI)处理组和 1个对照组，Cr(Ⅵ)处理细胞时间为24h。L02肝细胞凋亡形态学和 生化特征改变分别用吖啶橙染色法和琼脂糖凝胶电泳检测，细胞凋亡 率用流式细胞仪分析测定。Cr(VI)诱导L-02肝细胞氧化损伤程度选用 超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(cAT)活性水平和谷胱甘肽 (GSH)含量指标评价。L-02肝细胞p53 mRNA、easpase3 mRNA与 p53蛋白表达水平分别采用逆转录PCR(RT-PCR)与免疫组化进行 检测。 结果：在39mol／L-1弘mol／L Cr(WI)处理浓度，Cr(W)对L-02肝细 胞具有明显纽胞毒性，其细胞存活率与cr(vi)处理浓度呈负相关(相 关系数r=-O．918)。吖啶橙染色在荧光显微镜下观察副L02肝细胞核 固缩、细胞边缘出现凋亡小体；DNA琼脂糖凝胶电泳出现特征性梯 形条带。流式细胞仪分析表明，3#moFL、瓤lnol／L、99mol／L与 12pmol／L Cr(VI)处理组L02肝细胞平均凋亡率分别为S．54％、8．79％、 11．20％、13．97％，除3弘mol／L Cr(VI)处理组外，其余各处理组与对照 组比较差异有显著性(PO．05)，其细胞凋亡率与Cr(VI)处理浓度呈 正相关(^，=0．997)。L-02肝细胞经o(Ⅵ)处理241i后，SOD与CAT 活性、GSH含量均下降，其中1犁mol／L CIⅥ)处理组的CAT活性与 4个Cr(VI)处理组GSH含量低于对照组(Po．05)。犁mol／L、6#mol／L、 鳅mol／L Cr(Ⅵ)处理组细胞p53 mRNA表达水平、6 la mol／L Cr(VI)处 理组细胞p53表达蛋白和3Ⅳmol／L Cr(VI)处理组细胞caspase3 mRNA 表达水平明显高于对照组(Po．05)。细胞凋亡率与SOD活性、CAT 活性呈负相关(Y分别为．0．952和．0．885)p53 mRNA表达与caspase3 mRNA表达正相关(’，=0．890)；p53蛋白表达与GSH含量负相关 (v=一0．929)。 结论：Cr(W)具有显著诱导L-02肝细胞凋亡的作用，在 3肛mol／L一12／tmol／L 3肛mol／L一12／tmol／L Cr(VI)浓度范围，L-02肝细胞凋亡率随Cr(VI)处理 浓度的增加而增加；Cr(VI)导致的细胞氧化损伤即细胞内抗氧化系统 平衡的破坏是Cr(VI)诱导细胞凋亡的主要原因；Cr(VI)诱导细胞凋亡 的主要途径是p53依赖性途径，但在较高Cr(VI)处理水平，不排除非 p53．caspase3途径的存在。 关键词：六价铬；细胞凋亡；氧化损伤；p53；caspase3 Study Study on mechanism of L-02 hepatocyte apoptosis induced by hexavalent chromium Abstract o坷ective：To explore the effect of hexavalent chrominm[Cr(VI)】 on apoptosis of L-02 hepatocytes and its mechanisms in vitro test． Melhods：The effects of Cr(VI)Oil cell survival rate were assessed on the reductions of tetrazolium dye(M丁n in cultured L．02 hepatocytes． L．02 hepatocytes in all tests were incubated with 3／Mmol／L,@mol／L， 9肛moI／L，1私mol／L concentrations of Cr(VI)for 24h according to cell survival rate．Acridine orange staining and agarose gel electrophoresis were performed to detect morphological features and DNA fragmentation characteristic of