临床分离耐喹诺酮阴沟肠杆菌gyrA基因和parC基因突变的检测-内科传染病学专业论文.docxVIP

天津医科人学硕士学位论史=L氟喹诺酮类抗生素是广谱抗菌素，由于其对革兰氏阳性菌及革兰氏阴性 天津医科人学硕士学位论史= L氟喹诺酮类抗生素是广谱抗菌素，由于其对革兰氏阳性菌及革兰氏阴性 、、 菌的良好抗菌活性被临床广泛应用，但近年来临床分离常见致病菌对喹诺酮 类抗菌素耐药率迅速上升。作为条件致病菌的阴沟肠杆菌已成为院内感染的 常见致病菌之一，可引起呼吸道、泌尿道及伤口等部位的感染，其耐喹诺酮 菌株亦呈不断增多趋势，使l临床应用受到限制。体研究收集从本市四家医院 ， 2000年6月--2001年6月临床分离的59株阴沟肠杆菌，通过药敏试验测定 筛选出30株耐喹诺酮菌株(萘啶酸MIC3299／m1)，结合聚合酶链反应一限 制性片段长度多态性(PCR．RFLP)及聚合酶链反应一单链构象多态性 (PCR—SSCP)分析技术，检测耐药菌gyrA基因及parC基因突变情况，并分—————’一—————一 析基因突变与喹诺酮耐药表型的关系。(gyrA基因PCR—RFLP检测结果显示， 、 30株临床分离耐喹诺酮菌株的gyrA全部(100％)存在Ser．83位点突变； PCR—SSCP分析显示除Ser一83位点突变以外还存在其它类型的位点突变。gyrA 基因突变株中29株(96．7％)对萘啶酸呈现高水平耐药(MIC10241．tg／m1)， 25株(83．3％)对萘啶酸、环丙沙星(MIC_499／m1)及氧氟沙星(MIC_899／m1) 交叉耐药。30株耐喹诺酮阴沟肠杆菌parC基因的PCR--SSCP分析结果显示， 12株(环丙沙星MIC 8p．g／ml 161．tg／m1)存在parC基因点突变，占40％，18 株无parC突变：7本研究结果表明，gyrA基因突变是对喹诺酮类药物耐药的主 要原因，parC基因突变可能在对氟喹诺酮类抗菌药物高水平耐药的形成中起 了补充性作用。此外，临床分离菌对喹诺酮类药物耐药可能还存在膜通透性 降低和，或主动泵出等多种机制。 关键词：阴沟肠杆菌；、喹诺酮；耐药性；基因突变?RFLP；SSCP 天津医科大学硕士学位论文Fluoroquinolones 天津医科大学硕士学位论文 Fluoroquinolones are broad-spread antimicrobial agents which have effective antimicrobacterial activity against gram·-positive and gram··negative bacteria．However,widespread of this class of agents has resulted in an increasing incidence of fluoroquinolones resisance in many bacterial species including Enterobacter cloacae．E．cloacae is an important conditional pathogen which may cause infections of lower respiratory tract and urinary tract． Recently，the emergency of fluoroquinolone resistance and the increasing development of resistant strains in E．cloacae isolates have been reported．The resistance of this organism has become important in clinical，because it was associated with therapeutic failure． Studies on the mechanisms of quinolone resistance in gram—negative bacteria have demonstrated that alterations in the GyrA subunit of DNA gyrase are primarily responsible for high level resistance to nalidixic acid and the decreased susceptibility to fluoroquinoiones，and that mutations in parC， which encodes the ParC subunit of toposomerase IV,play a secondary role in enhancin