课件：基因治疗的一个发展——.pptVIP

可编辑 可编辑 指导教师：卢兴浩 孙梓桉、孟芳梅、张小萌、李珊、李子剑、董玮琪、梁其冬、葛煜、孙康、刘龙飞 小组成员： 第一次的讨论：孙梓桉为主席 第二次的讨论：孟芳梅为主席 第三次的讨论：葛 煜为主席 * 汇报内容 基因治疗的概念 基因治疗应用的途径 常见疾病的基因治疗 基因治疗存在的危险性 基因治疗 基因治疗技术 1）化学法：将正常基因DNA（及其拷贝）与辅助物混合，形成的物质直接倾入培养基中与细胞接触，将DNA输入细胞内，并整合于受体细胞的基因组中，在适当的条件下，整合基因得以表达。这种方法简单，但效率极低。 2）物理法：包括电穿孔法和直接显微注射法。 　　 ①电穿孔法：通过电击使细胞细胞膜发生变化，周围基质中的DNA可渗进细胞，但有时也会使细胞受到严重损伤。 ②显微注射法：显微注射是在显微镜直视下，向细胞核内直接注射外源基因，但一次只能注射一个细胞，工作耗力费时。 3）同源重组法：同源重组法是将外源基因定位导入受体细胞的染色体上，在该座位因有同源序列，通过单一或双交换，新基因片段替换有缺陷的片段，达到修正缺陷基因的目的。但对于体细胞基因治疗，体外培养细胞的时间不能过长，筛选量大，故在临床上应用也受限制难以进行。若提高重组率，这种方法则得以发展。 基因治疗技术 4）病毒介导基因转移：（目前最常用）病毒介导基因转移是以病毒为载体，将外源目的基因通过基因重组技术，将其组装于病毒上，让重组病毒去感染受体宿主细胞。 目前应用的有两种病毒介导基因转移方法。 　　 ①反转录病毒载体：反转录病毒是RNA病毒，RNA利用反转录生成为DNA，再整合到宿主细胞基因组。 优点：转化细胞效率高；感染广谱动物物种和细胞类型；可长期存留，一般无害于细胞。 缺点：只能把其DNA整合到能旺盛分裂细胞的染色体；有使宿主细胞感染病毒和致癌的危险性；由于病毒整合基因组是随机的，可能激活细胞的原癌基因，以及因随机插入发生插入突变。 ②DNA病毒介导载体：DNA病毒包括腺病毒、SV40、牛乳头瘤病毒、疱疹病毒等，一般认为这类病毒难于改造成缺陷型病毒。后来证明，载有外源DNA的复制缺陷腺病毒呈现与普通DNA相同繁殖的特点。 病毒性疾病的基因治疗 随着对乙型肝炎病毒（HBV）基因组的序列、结构蛋白的功能及其生命周期的进一步了解，产生了一系列针对阻断病毒基因的表达或功能的基因治疗方法。 1　反义寡核苷酸　　 反义寡核苷酸指合成的20个碱基左右的一小段核苷酸，按照沃森-克里克碱基配对原则，与特定的靶序列杂交，从而抑制基因的表达。 当反义寡核苷酸特异地与HBVmRNA结合形成RNA-DNA（反义DNA）或RNA-RNA（反义RNA）杂交体，可定向抑制和阻断其复制和表达。 2　核糖核酸酶　　 核糖核酸酶是一类具有催化活性的小分子RNA，能特异地结合于靶RNA上，形成RNA-RNA杂交体，催化特定序列RNA分子的切割。　　 核糖核酸酶基因能通过多种病毒（载体传递系统被传递，并在靶细胞中持续表达。由于其可以不可逆的使靶RNA失活，可在体外循环利用，催化效率高，能避免重复给药，可能产生终生保护。　　 3　显性失活突变体（DN突变体）　　 细胞内干扰性多肽蛋白的合成能干扰其正常对应物的生理功能。显性失活突变体在体外可特异性抑制HBV复制，是值得研究的新型抗病毒剂。 显性失活突变体优于核糖核酸酶、反义寡核苷酸,潜在优势在于它与病毒序列变异无相关性，从而减少了形成或累积成“治疗逃逸突变株”的危险；而且产生抗病毒作用所需的细胞内浓度相对较低；再者，DN突变体不影响细胞的转录，所以对转染的细胞没有直接的毒性作用。 癌症的基因治疗 1.基因导向酶解药物前体治疗（GDEPT） GDEPT是通过利用肿瘤细胞和正常细胞之间基因表达的差异，使某一酶基因仅在肿瘤细胞转录表达，以增加肿瘤基因治疗，破坏细胞的特异性。 2.插入自杀基因 将编码某一敏感性因子的基因转入靶肿瘤细胞，使该细胞对换某种原本无毒或低毒的药物产生特异的敏感性而死亡。这一表达敏感性因子的基因称为药物敏感基因或自杀基因。 多数自杀基因疗法研究是通过编码病毒或细菌的酶来介导药物敏感性，即肿瘤细胞产生的酶把药物的无活性形式转化为毒性代谢产物，从而抑制核酸合成。自杀基因治疗的缺点是仅杀伤S期细胞，即仅能诱导一小部分分裂细胞发生死亡。 3.肿瘤细胞药物增敏基因治疗 该疗法是指将外源基因插入肿瘤细胞后，改变肿瘤细胞对药物的敏感性。 如将钙调素基因转入癌细胞，利用其对癌细胞MDR的逆转作用，使癌细胞对化疗药物的敏感性明显提高。 4.肿瘤耐药基因治疗 通过基因转移技术转移耐药基因到正常器官组织，以保护其免受化疗药物的毒性作用。该疗法