课件：二抗原与抗体.pptVIP

生物水平抗体生成技术 细胞工程抗体生成技术 基因工程抗体生成技术 多克隆抗体（抗血清） 单克隆抗体 基因工程抗体 polyclonal antibody （一 ）、 多克隆抗体 多克隆抗体（polyclonal antibody） 采用传统免疫方法，将抗原注入动物机体，数次免疫后，采取动物血液，分离血清，由此获得的抗血清就是多克隆抗体。 指抗原物质进入机体，刺激不同B细胞产生的针对不同抗原决定簇的多种抗体混合物。 如:免疫血清（含多种特异性抗体）。 实际意义： 1.预防、治疗感染性疾病， 2.诊断疾病、鉴定细菌 3.表达产物特异性检验 交叉反应 传统抗血清 抗 原 免 疫 所有抗体混合 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 脾 脏 淋巴結 B 細胞 monoclonal antibody（McAb） （二）、 单克隆抗体 癌细胞 可培养生长 浆细胞 可分泌抗体 融合瘤 Hybridoma Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y 细 胞 融 合 两组染色体混在一起 也可以培养生長 产生专一性抗体 一個 B cell 只 产生一种抗体 1975年Kohler和Milstein将抗体产生细胞与具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞融合，通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为单克隆细胞系。 淋巴细胞杂交瘤技术 1.单克隆抗体（monoclonal antibody，McAb） 由克隆化的B细胞杂交瘤产生的针对单一抗原决定簇的抗体。 3.HAT培养基：次黄嘌呤(H), 氨基蝶呤(A)和胸腺嘧啶核苷(T)。 2.杂交瘤细胞 骨髓瘤细胞 --- 无限增殖； 免疫B细胞 --- 合成、分泌特异性抗体。 单抗与多抗的比较 1.特异性高 2.均质性好 3.纯度高 4.重复性好 5.效价高 6.容易标准化 7.可大量生产 (三)、McAb技术基本过程 1.在血清学技术方面：可提高各种血清学的方法检测抗原的特异性、敏感性、重复性、稳定性。 2.在免疫学基础研究方面：免疫细胞的分离、鉴定和分类，以及研究各种膜表面免疫分子的结构和功能。 3.在肿瘤免疫治疗方面：免疫导弹。 4.在抗原的分析、纯化方面：亲和层析 5.制备抗独特型抗体。 （四）、McAb的应用 THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 * * * * * * * 五类免疫球蛋白 重链有五种类型： γ链：IgG μ链：IgM α链：IgA ε链：IgE δ链：IgD 二、Ig的分子结构 四条对称多肽链 2 重链（H链） 450aa：50Kd 2 轻链（L链） 214 aa：25Kd -S-S- L-H-H-L H链 按Ag性分出5类：μ 、γ、α、δ、ε、 Ig相应分出5类：IgM IgG IgA IgD IgE L链 按Ag性分出两型：κ、λ （一）Ig单体的分子结构 1.基本结构： 2.三个功能区 1）可变区（ variable region, V区） （1）组成：N端轻链的1/2和重链的1/4组成，含有110个氨 （2）功能：与抗原结合，存在与抗原决定簇结合的特异性结合点。一个IgG分子在功能上是双价。 2）稳定区（ constant region, C区） （1）组成：C端轻链的1/2和重链的3/4组成，在CH又有三个亚单位即CH1，CH2和CH3组成 （2）功能：表现各自的功能。 结合补体(CH2)，粘附C(CH3)，通过胎盘和粘膜，遗传标志的反映区 3）绞链区（hinge region） 连接可变区与稳定区，起轴承关节作用 （二）Ig的水解片段与生物学活性 1、免疫球蛋白的水解片段 （1）木瓜蛋白酶：抗原结合片断：Fab片段， 可结晶片段：Fc片段 （2）胃蛋白酶 2、Fab片段的组成与生物学功能 （1）组成： （2）生物学活性： 3、FC片段的组成与生物学活性 （1）组成： （2）生物学活性： （三）特殊结构 1.连接链（joining chain，J链) 2.分泌片（secretory piece, SP） THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 三、各类免疫球蛋白的特性和免疫学功能 2、血清中含量最多,占Ig的70~80%。持续时 间最长，在体液免疫中发挥主导作用。