课件：湘南学院分子生物学基因治疗.ppt

ADA缺乏症治疗步骤： （体外基因修饰／骨髓移植法） 1、麻醉下，从病人髂嵴抽取骨髓液， 分离淋巴细胞。 2、将病人的淋巴细胞与携带ADA基因 的逆转录病毒混合培养，经病毒转移 ADA 基因进入淋巴细胞。 3、清洗淋巴细胞；去除多余的病毒筛选带 有ADA基因的淋巴细胞，检测其ADA含 量，确定ADA基因在淋巴细胞中有满意 表达后，将带有此基因的淋巴细胞输回 病人体内。 4、密切观察病人各项免疫指标的变化，必 要时重复。 该女童共接受了7次自体细胞输注，其ADA水平稳定升高，从不到正常人的1％增至25％，转移的ADA基因在体内长时间持续表达。免疫功能增强，临床症状改善，基本恢复正常。 SCID病人的治疗 ADA基因缺陷临床治疗的潜在问题： 淋巴细胞是ADA缺乏症基因治疗的常用靶细 胞，但淋巴细胞的寿命为一个月到数个月不等， 随着转染淋巴细胞的死亡，ADA表达量下降， 必要时重复基因治疗。 选择寿命长的骨髓造血干细胞。 法国成功地治疗了5例患儿，但不久发现 这些患儿出现了类白血病症状而被迫停止。 近来，来自美国、意大利和奥地利的科学家们联合 公布了一项关于ADA缺乏症基因治疗试验的最新研究成果。 研究者们对10名有严重的联合性免疫缺陷症的ADA缺乏症 患进行了基因治疗。 他们将携带有ADA基因的逆转录病毒转导至患者自体 CD34+骨髓细胞，并将这些细胞重新输回患者体内。 在经过平均4年的随访后，所有转导的细胞均稳定存在于 血液中并分化成含有ADA的骨髓细胞和淋巴细胞。其中8名 患者体内持续表达ADA，不再需要酶替代治疗，没有嘌呤 代谢异常的症状。9名患者T细胞数量增加，功能恢复。 家族型高胆固醇症 病因： 因为 (LDLR)基因突变，肝脏缺乏低密度脂蛋白 受体(LDLR)，LDL不能正常代谢，造成血浆LDL和胆 固醇升高的遗传病。患者可在较年轻时会出现冠心病 或心肌梗死。 1992年Michgan大学的研究人员对一例28岁的 加拿大该病女性患者进行了基因治疗。 A：手术第一天切除病人三分之一左肝叶； B：对切下的肝进行胶原蛋白酶灌流，分离肝细胞； C：导入逆转录病毒—LDLR复合体于肝细胞中(手术第三天)； D；收集导入后的肝细胞(手术第四天)； E：向下腔系静脉注射肝细胞(手术第四天) 基因疗法 治疗LDL 受体缺陷症 1991年12月我国成功治疗乙型血友病 凝血因子Ⅸ基因 巨细胞病毒基因 凝血因子Ⅸ基因与巨细胞病毒基因重组体 患者皮肤 成纤维细胞 患者皮下 凝血因子Ⅸ 重组 植入 表达 导入 1998年1月美国波士顿圣伊丽莎白医学中心治疗 下肢循环障碍性疾患 ，严重者靠截肢治疗。 血管内皮 生长因子基因 患者肌肉 注射 患者肌肉长出新血管 第五节 基因治疗目前存在的问题 （一）安全性 1、感染 2、有益基因的丢失 3、诱发癌变 （二）稳定性 1、基因转录系统不稳定 2、形成不正确的信息RNA 3、基因表达的控制因素复杂 4、靶细胞死亡 （三）免疫性 （四）伦理问题 第1个基因治疗死亡的病例 1999年9月17日 美国宾夕法尼亚大学吉姆.威尔逊教授基因治疗“尿素循环障碍”病 病人：Jesse，男，18岁， 患鸟氨酸氨基甲酰转移酶 不足症的罕见遗传性疾病，先天性尿素循环障碍 治疗方案： 1、鸟氨酸转氨甲酰酶基因与腺病毒DNA重组 2、38万亿携带鸟氨酸转氨甲酰酶基因的腺病毒 注入Jesse肝脏 Jesse病情恶化：高热40oC,血氨含量升高，肝性脑病，肺功能衰竭，第4天死亡。 宾夕法尼亚大学承认治疗程序有错 不能用病毒直接注入人体！ 基因治疗的应用与展望 应用： 展望： 遗传性疾病、心血管疾病、肿瘤、感染性疾病、神经系统疾病 进一步寻找切实有效的基因 精密调控外源基因在人体内的表达 体细胞移植和重建的生物学研究 减少外源基因对机体的不利影响 THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 选择适宜的基因载体和基因转移系统 获得目的基因 合理选择靶细胞 外源基因表达的筛检 回输体内 第三节 基因治疗的基本程序 一、获得目的基因 目的