课件：肿瘤体外药敏检测完整.pptVIP

THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 * 荧光强度与活细胞数量的关系 技术流程 Tumor Single Cell suspension Mechanical and enzymatical dissociation Incubation for 3-5 days Addition of drugs/medium ATP- Luminescence ATP extraction and stabilization Software Evaluation Construction of dose-response plots 国内外研究历史回顾 1. 1982年，Moyer等首先提出内源性ATP的含量可以反映细胞活性;随后Kangas等相继证实生物荧光技术是一种敏感、可靠的确定各种细胞活性的检测方法。 2. 自1988年，Sevin首先将此方法用于新鲜肿瘤组织的药敏检测，在欧洲和美国已经进行了大量的临床应用研究。 3. 1998年，Kurbacher等人报道了ATP-TCA辅助化疗与传统化疗比较的临床Ⅱ期试验结果，试验结果表明，ATP-TCA指导的化疗治疗复发性卵巢癌较传统化疗模式更能提高临床疗效，延长病人总生存期和无进展生存期。 4. NIH的GOG (Gynecologic Oncology Group)项目组认为ATP-TCA是最有发展前途的一种药敏试验方法，已纳入重点科研项目(1998)。 目前先进国家对该技术的评价 1998年德国DCS公司将该技术产业化，并获得国际ISO质量评估体系认证，在欧洲和北美市场获得准入。 2. 2001年，美国全国医疗保险协会(Health Maintenance Organization)认为，该技术是一项精确和可靠的并能指导医生选择用药的先进技术，建议在全美进行医疗保险赔付。目前在加州等15个州已获医疗保险赔付。 3. 2003年日本厚生省和保险联合会也认为，该技术是一项先进的临床医学项目，该技术指导的肿瘤化疗较传统的化疗方案更能明显提高胃肠道肿瘤的治愈率，建议该项技术在全国范围内获得医疗保险赔付。 ATP-TCA技术是目前最先进的体外药敏技术，该技术敏感可靠，具有极大的临床应用价值 主要试剂仪器 ATP-TCA核心试剂盒（德国DCS）：包括完全分析培养基（CAM）、最大ATP抑制剂、组织消化酶液、ATP提取液、荧光素-荧光素酶（lulu）、ATP标准品、无菌96微孔培养板。自发光分析仪（德国Berthold）、超净工作台 ATP-TCA技术的核心试剂 ◎. 荧光酶试剂(luciferin-luciferase counting reagent) 热稳定性和发光效率均好的重组酶试剂保证检测的敏感性和可靠性，满足临床实际工作的需要 ◎. 培养基(complete assay medium) 肿瘤细胞选择性培养基支持肿瘤细胞生长增殖，促进正常细胞死亡，从而保证药敏检测的肿瘤细胞特异性 培养前后细胞组成变化 培养前细胞组成 3-5天培养后细胞组成 淋巴 上皮 成纤维 肿瘤 淋巴 上皮 成纤维 肿瘤 细胞 细胞 细胞 细胞 细胞 细胞 细胞 细胞 40-50% 10-25% 5-10% 10-20% 1% 10% 10% 80% 选择性培养基的研究结果表明该培养基具有良好的选择性，适合肿瘤体外药敏检测的需要 ATP-TCA 药物测试方式 THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 实 验 过 程 实体瘤（也可以是穿刺样品或腹水等液体样品）先被切碎，并用酶分离成细胞悬液。这一过程并不影响肿瘤细胞的活性。 将细胞悬液加入到含有浓度不同的化疗药物的无血清培养基（CAM）中，在培养基板中培养3-5天。CAM培养基可以抑制非瘤细胞的生长，选择性培养肿瘤细胞。 培养后，加入可以稳定细胞内ATP的提取试剂，提取出ATP。 加入荧光素-荧光素酶系统，在板式发光分析仪上进行ATP的检测。 根据含药孔的荧光值与无药孔（M0）的荧光值的比较，得出该浓度化疗药物对肿瘤细胞的抑制值。 做出化疗药物的剂量-抑制曲线，得到AUC值、IC90、IC50以及敏感度指数SI值，判断化疗药物的敏