卵形鲳鲹ToPrx1和ToTrx1基因的特征和功能研究-水产养殖专业论文.docxVIP

上海海洋大学硕士学位论文 上海海洋大学硕士学位论文 万方数据 万方数据 rToPrx1 为巯醇依赖性蛋白，具有明显的抗氧化活性。 2. 卵形鲳鲹硫氧还蛋白 1 硫氧还蛋白 1（Trx1）是保持机体细胞内环境氧化还原平衡的关键因素。本实 验通过随机测序卵形鲳鲹 cDNA 文库，通过比对分析得到了卵形鲳鲹硫氧还蛋白 1 （ToTrx1）的 cDNA 序列，该 cDNA 序列全长 786 bp，开放阅读框 324 bp，编码 107 个氨基酸多肽，5’非编码区有 116 bp，3’非编码区 346 bp；卵形鲳鲹 ToTrx1 序列与其它物种已知 Trx 序列进行多重序列比对分析发现，ToTrx1 含有一个硫氧 还蛋白家族高度保守的二硫键/巯基活性位点 CGPC；卵形鲳鲹 ToTrx1 mRNA 在受 检测的心、胃、鳃、脑等 13 个组织中均有不同程度的表达，并在胃、鳃和背鳍组 织中达到最大；对卵形鲳鲹进行美人鱼发光杆菌侵染实验后发现，ToTrx1 mRNA 在卵形鲳鲹免疫相关组织肝、脾、肾和肠道中，在不同时间点分别呈现出极显著 上调；接着对卵形鲳鲹 ToTrx1 进行体外重组表达，得到融合蛋白 rToTrx1，并且 通过 Ni-NTA HisBind 树脂进行纯化复性，通过 Western blotting 检测过后，最终得 到具有活性的目的融合蛋白 rToTrx1；最后通过胰岛素减少实验对融合蛋白 rToTrx1 的二硫键还原活性进行了检测，证明了 rToTrx1 具有明显活性。 本研究对卵形鲳鲹 ToPrx1 和 ToTrx1 基因序列进行了分析，克隆表达得到了卵 形鲳鲹的 rToPrx1 和 rToTrx1 融合蛋白，验证了他们的蛋白活性及功能，同时探究 了 ToPrx1 和 ToTrx1 的 mRN A 在卵形鲳鲹组织中的表达调控模式，为系统化研究 卵形鲳鲹免疫应答机制建立了基础理论。 关键词：卵形鲳鲹；过氧化物还原酶；硫氧还蛋白；免疫应答；基因克隆；基 因表达；抗氧化功能 III Characterization and functional analysis of ToPrx1 and ToTrx1 genes from golden pompano Trachinotus ovatus ABSTRACT Golden pompano (Trachinotus ovatus) has been one of the most important marine fish commercially cultured in South China，because of its advantage of rapid growth, less intermuscular bones and delicious taste. Recently, commercial culture of golden pompano is also increasing in the south-east Asian countries such as Malaysia and Singapore. However, the main threat to the industry is infection disease, which results in a huge loss to the commercialization of farming. Therefore, a in-depth study of immunity mechanism must be performed to find ways to improve the disease resistance of golden pompano, and provie some basis for the treatment of diseases of golden pompano. In this study, the full- length cDNA sequences of Prx1 and Trx1 were obtained by randomly sequencing, and the sequence was verified by PCR and sequencing, multiple sequence alignment and phylogenetic trees were performed with the known amino acid sequences of Prxs and Trx, respectively.RT-PCR was performed to to investigate the tissue expression pat