硫酸软骨素的分离纯化及其抗凝血作用的研究-病理生理学专业论文.docxVIP

中文摘要硫酸软骨素的分离纯化及其 中文摘要 硫酸软骨素的分离纯化及其 抗凝血作用的研究 摘 要 本文旨在建立从猪软骨中分离纯化硫酸软骨素的方法，并研究硫酸软骨素 的抗凝血作用，以及乙醛、乙醇对硫酸软骨素抗凝血作用的影响。从猪软骨中抽 提出硫酸软骨素粗品采用了稀碱一酶解提取法；在纯化过程中，先采用凝胶过墟 层析法对粗品进行脱盐、纯化，并比较了Sephedax G-25和Sephedax G-100的 纯化效果，发现前者在完成脱盐的同时，尚能部分地去除蛋白质；脱盐后又采用 了离子交换层析法进一步对其进行了纯化，并先后比较了三种离子交换剂和三 种不同pH值的洗脱液对纯化效果的影响，最后碡定了采用大孔离子交换荆 D001一CC、在pH4．0的乙酸一乙酸钠缓冲液洗脱的条件下，纯化效果最佳。在对 纯品的鉴定过程中，经Lowry氏法检测不出蛋白质的存在}薄层层析法也耒出 现蛋白质、肽和氨基酸区带；纯化的硫酸软骨素经醋酸纤维素薄膜电泳呈现单一 区带，且泳动速度与Sigma公司硫酸软骨素标准品一致；红外吸收光谱法检测 其特征与Sigma公司硫酸软骨素标准品极为相似，并与文献报道一致；商效液 相离子色谱法测得样品中硫酸软骨素含量为99．7472％。提示纯化的样品中已 不台蛋白质、肽、氨基酸及其他酸性粘多糖，已达到分析纯。为了研究硫酸软骨 素的抗凝血作用，将不同浓度的硫酸软骨素加入兔全血中，测定其凝血时间 (CT)，结果显示硫酸软骨素具有一定的抗凝血作用(14．33土0．72，P0．01)， 但其作用远较肝素为弱(87．04±9．20)；硫酸软骨素经与500mmol／L乙醛作用 后，凝血时间明显延长(27．59±3．59，P0．05)；而500mmol／L乙醇对硫酸软 骨素及肝素的抗凝血作用无影响(P0．05)；表明硫酸软骨素具有一定的抗凝 血作用，但远较肝素弱．乙醛可以提高硫酸软骨素的抗凝血作用，而乙醇无此作 用。 关键词猪：硫酸软骨素；提纯：抗凝血 研究生：吕惠中(病理生理学) 导师：耿芳宋崔瑞耀 英文摘要ISOLATl0N 英文摘要 ISOLATl0N AND PURIFICATION 0F CHoN DROITIN SULFATE AND ITS ANTICOAGULA TIN FUNCTION STUDY ABSTRACT The study is to isolate and purify chondroitin sulfate from pig cartilage and investigate the effect of anticoagulati。n of chondroitin sulfate and the influences of acetaldehyde and ethanol upon this effect．The method of dilute-enzyme hydrolysis has been used tO extract chondroitin sulfate from pig cartilage．Next，the salt in the crude product has been get rid of by using gel filtration chromatography．The comparative experiment shows that Sephe— dax G一25 has advantage over Sephedax G-100 in purify effect．The purification process has been done by ion exchange chromatography．After comparision of three ion exchange res— ins and three dilution acidities，the optimum dilution condition has been determined．In the course of identification，the results show that the product has no protein，no peptide，no amino acid and on other glycosaminoglcans by using Lowrys test，thin section chromatog— raphy and cellulose acetate membrane electrophoresis．The infrared scanning eharaeteris— tics of the product is in conformity with that o