邻苯二甲酸酯类化合物的拟雌激素活性及对小鼠卵巢功能的影响-劳动卫生与环境卫生学专业论文.docxVIP

天津医科大学硕士研究生学位论文邻苯二甲酸酯类化合物的拟雌激素 天津医科大学硕士研究生学位论文 邻苯二甲酸酯类化合物的拟雌激素 活性及对小鼠卵巢功能的影响 摘要 目的：近年来，环境内分泌干扰物对人类和野生动物生殖发育的有害影响 已成为国际性热点问题，尤其受到欧美及日本等工业发达国家的高度重视。邻 苯二甲酸酯类化合物(眦s)是世界卫生组织(wHo)于1995年公布的、 必须加强控制的、一类扰乱内分泌的化学物质，并且已造成全球性的环境污染。 其中邻苯二甲酸二(2．乙基己基)酯(di．(2一ethylhexyl)Phthalate，DEHP)和 邻苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate，DBP)的应用最广泛、污染最严重，已 被美国国家环保局(EPA)列为优先控制污染物。为评价PAEs类的拟雌激素 活性及其对雌性小鼠性腺功能的影响，探讨其对人类生殖健康的潜在危害，本 课题选用DBP和DEHP为研究对象，通过体外实验和体内实验，研究了二者 的拟雌激素活性及对小鼠卵巢功能的影响。本研究弥补了当前DBP和DEHP 对雌性性腺卵巢毒性方面研究资料的不足，并为全面评价PAEs类化合物的毒 理学作用提供了科学依据。 方法：(1)体外实验：采用对雌激素敏感的人乳腺癌细胞系MCF．7细胞， 在RPMll640培养基中采用开放式单层贴壁培养，开始实验前将细胞用磷酸盐 缓冲液(PBS)洗涤后改为在无酚红RPMll640培养基中培养5d，实验设无水 乙醇(0．1％)溶剂对照组、雌二醇(E2)(109mol／L)雌激素阳性对照组、DBP 各剂量(10-10一103mol／L)组和DEHP各剂量(10-s。100mol／L)组，采用MCF．7 细胞增殖试验、细胞生长曲线、细胞核有丝分裂指数、细胞贴壁率和细胞克隆 形成试验，通过对MCF一7细胞的生长和增殖情况及细胞活力进行观察和分析， 评价其拟雌激素效应：(2)体内实验：采用雌性性成熟昆明种小鼠，按体重随 机分为高剂量、中剂量及低剂量三个实验组和一个溶剂对照组，每组16只。 受试物DBP和DEHP分别溶解于二甲基亚砜(DMSO)中，采用腹腔注射染 毒，DBP染毒剂量分别为400、40、4mg／kg体重，DEHP染毒剂量分别为1250、 天津医科大学硕士研究生学位论文125、12．5mg／kg体重，每天腹腔注射一次，左右下腹交替进针，注射体积为 天津医科大学硕士研究生学位论文 125、12．5mg／kg体重，每天腹腔注射一次，左右下腹交替进针，注射体积为 0．1mw209·d)，溶剂对照组给予等量DMSO，连续染毒14d。阴道脱落细胞涂 片法观察动情周期变化；分别于终止染毒1d和15d后颈椎脱臼处死处于动情 前期的小鼠7—8只，分离卵巢和子宫，分析天平称重，计算脏器系数：并取左 侧卵巢固定，切片，染色，在光学显微镜下观察组织病理学变化。 结果：(1)体外实验：与溶剂对照组相比，10Smol／LDBP和103mol／LDEHP 处理2411就可促进MCF-7细胞增殖，提高增殖指数；随着培养时间延长至96h， 浓度为1 o-1叱10-6mol／L与10。4—100mol／L的DBP和浓度为10-5～10一moFL的 DEHP也表现出促进细胞增殖的效应，且DBP浓度在10Smol／L、DEFIP浓度 在103mol／L时，MCF一7细胞的增殖活性达到最大，二者的相对增殖效应分别 为E2的98．16％和90．92％，相对增殖能力分别为E2的万分之一和百万分之一； 与溶剂对照组相比，DBP和DEHP均能使MCF．7细胞的生长曲线显著上移， 并且二者可以缩短MCF-7细胞的群体倍增时间：在对数生长期，DBP和DEHP 均能提高MCF．7细胞的细胞核有丝分裂指数；10巧mol／L DBP作用4h、 103molFL DEHP作用8h后，MCF-7细胞的贴壁率显著升高；10-Smol／L DBP 处理48h、103mol／L DEHP处理72h就可增强MCF．7细胞形成细胞克隆的能 力。(2)体内实验：与溶剂对照组相比，DBP 400mg／kg组和40mg／kg组的小 鼠动情后期、动情间期和动情周期总时间均显著延长，且存在剂量．反应关系： DEHP 1250mg／kg组和125mg／kg组的小鼠动情后期和动情间期的持续时间显 著延长，且DEHP 12S0mg／kg组部分小鼠的动情周期消失；DBP三个染毒组 和DEHPl250mg／kg组小鼠的子宫脏器系数均显著高于溶剂对照组；卵巢组织 病理学检查发现，DBP和DEHP各染毒组小鼠卵巢中发育成熟的卵泡相对减 少，闭锁卵泡和黄体则相对增多，各染毒组均未观察到卵巢内颗粒细胞变性、 坏死等明显的组织病理学变化。 结论：DBP和DEHP在体外均可促进雌激素依赖性人乳腺癌细胞