流感嗜血杆菌对离体气管粘膜上皮细胞的作用及细菌感染对COPD患者气道炎症影响的研究-内科学(呼吸科)专业论文.docxVIP

英文缩略语L 英文缩略语 L 流感嗜血杆菌 互 m．|萋 不可分型流感嗜血杆菌 一 船 副流感嗜血杆菌 “ {至| 流感嗜血杆菌b型 _ 一 慢性阻塞性肺疾病 n 一 慢性阻塞性肺疾病急性加重 L 一 人气管粘膜上皮细胞 艮 糊 呼吸道II型肺泡上皮细胞株 乳 叫 扫描电镜 加 删 透射电镜 n 一 酶联免疫吸附法 拢 一 白介素一6 玎 一 白介素一8 ～～ 细胞间粘附分子～i M 肿瘤坏死因子一仪 坫 抵加 中性粒细胞弹性蛋白酶 n删 中性粒细胞 掀|辇 胎牛血清 拽 无血清培养基 孤 纸片扩散法药敏试验 儿 磷酸盐缓冲液 况 咧：彗麟一～ 核因子kaDB 扭 烟酰胺腺嘌呤核苷酸 幕二军医走学硕士学拄论丈流感嗜血杆菌对离体气管粘膜上皮细胞的作用及 幕二军医走学硕士学拄论丈 流感嗜血杆菌对离体气管粘膜上皮细胞的作用及 细菌感染对COPD患者气道炎症的影响研究 摘要 目的探讨不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)与气液界面无血清培养原代兔气 管粘膜上皮细胞的相互作用：将该菌作用于原代培养人的气管、支气管粘膜上皮细 胞，诱导其分泌和表达前炎症细胞因子并观察其变化：了解上海地区门急诊COPD 急性加重期(AECB)患者气道的细菌感染情况，分别比较脓痰组、白粘痰组的痰 炎性细胞数与细菌阳性率，并研究AECB患者气道细菌感染对气道炎症的影响。 方法(1)用低温酶消化法分离兔气管粘膜上皮细胞，无血清培养基及胶原覆 盖膜形成的气液界面培养方式培养，使上皮细胞分化成假复层粘膜纤毛上皮细胞， 然后加入NTHi感染上皮细胞，24小时后行扫描电镜(SEM)和透射电镜(TEM) 检查；(2)同上法分离人气管、支气管粘膜上皮细胞(HBEC)，无血清培养基培养细 胞融合成片，分别用NTHi、NTHi+红霉素(0．1mlg／L)、NTHi+红霉素(10mg／L)、 NTHi+庆大霉素(100mg／L)、NTHi+地塞米松(O．1mM)、正常未处理为对照组感 染HBEC24h后，ELISA法检测培养上清液中IL一8、TNF．a的水平和免疫组化法检 查细胞表达ICAM一1的变化；(3)收集门急诊慢性支气管炎、COPD急性加重期患 者i59份痰液进行分离培养，并对痰颜色进行评分、炎症细胞计数与细胞分类检查， 研究脓痰组、白粘痰组的痰炎性细胞数与细菌阳性率的差异；(4)收集97份取自于 97例AECB患者痰，被分为5组，铜绿假单胞菌组、肺炎克雷白杆菌组、流感嗜 血杆菌组、副流感嗜血杆菌组和无细菌生长组，15份痰取自于15例正常健康对照 组，对痰液进行炎性细胞计数与细胞分类检查，并用ELISA法测定痰上清液中自细 胞介素8(IL一8)、白细胞介素6(IL一6)与肿瘤坏死因子n(TNF—a)水平。 结果(1)NTHi感染24 h后SEM示气管粘膜上皮细胞表面结构破坏，90％ 细胞凋亡或死亡，纤毛倒伏、断裂，细菌与非纤毛上皮细胞连接，TEM示细胞表面 有较多微绒毛，细菌粘附在细胞表面，伴微绒毛延伸或伪足包绕细菌，将其吞噬至 胞内：(2)NTHi能显著诱导HBEC释放IL_8、TNF．0c和细胞膜表达ICAM一1，与正 常对照组相比(JDO．001)，0．1mg／L红霉素、庆大霉素组与NTHi组类似显著诱导HBEC 释放IL一8、TNF—a和ICAM·1的表达，10mg／L红霉素、地塞米松组抑制IL．8、耵瓶．a 分泌和ICAM—I的表达，尤以地塞米松组为显著；(3)共鉴定出致病菌92株(57．9％)， 第二军医是学硪t学位论t主要为流感嗜血杆菌、肺炎克雷白杆菌、铜绿假单胞菌，159份痰中副流感嗜血杆 第二军医是学硪t学位论t 主要为流感嗜血杆菌、肺炎克雷白杆菌、铜绿假单胞菌，159份痰中副流感嗜血杆 菌共57株f35．9％)，脓痰87份，细菌阳性率为82．7％，白粘痰72份，细菌阳性率 27．8‰两组相比有显著差异CPO．00I)，脓痰白细胞总数显著高于白粘痰(，O．001)： H)AECB患者痰中IL一8、IL．6、TNF—n的水平及中性粒细胞计数显著高于健康对照 组，铜绿假单胞菌组、Hi组、肺炎克雷白杆菌组IL．8、TNF．n的水平及中性粒细 胞计数均显著高于无细菌生长组，铜绿假单胞菌组和Hi组IL．8、TNF．a的水平高 于肺炎克雷白杆菌，HP组与无细菌生长组相比IL．8、TNF．a的水平无显著差异， 但中性粒细胞显著升高，AECB患者各组IL．6无显著差异。 结论(1)NTHi粘附在上皮细胞表面，通过伪足和微绒毛延伸包绕细菌，将细 菌吞噬在胞内，NTHi对上皮细胞有毒性作用，致上皮细胞变性坏死；(2)HBEC能 分泌IL-8和TNF—a，NTHi作用后显著诱导人气管粘膜上皮细胞分泌和表达前炎症 细胞因子，庆大霉素无抗炎作用，红霉素有抗炎作用，地塞米松有显著抗炎作用：