利用B基因的过表达或敲除来改变番茄果实中类胡萝卜素的组成和含量-生物化学及分子生物学专业论文.docxVIP

利用B基脚的过表达或敲除米改变番茄果实中娄胡萝h素的组成和含量 利用B基脚的过表达或敲除米改变番茄果实中娄胡萝h素的组成和含量 摘要 摘 要 番茄红素和B胡萝h素是两种重要的类胡萝h素，它们不但在高等植物生长发 育中起重要的作用，而且对人体健康和营养也非常重要。有报道显示它们能有效治疗 多种慢性疾病，而且大量的摄取还可以降低多种癌症的发病率。改进农作物中类胡萝 h素含量和组成，以提高农作物的营养价值成为近年的研究热点。番茄果实及其制品 是人类摄取番茄红素的主要来源，也是p胡萝h素的重要来源。因此，本课题致力于 利用基因工程技术改进番茄中番茄红素和B胡萝h素的含量，从而分别获得富含番茄 红素和B胡萝h素的优质番茄。 番茄红素B一环化酶是番茄果实类胡萝h素合成途径中最后的限速酶，它催化番 茄红素转化为B胡萝h素。当番茄红素B一环化酶过表达时，番茄中会积累0胡萝h 素；而当番茄红素B一环化酶表达被抑制时，番茄中会积累番茄红素。番茄中番茄红 素B一环化酶是一个多基因家族，现已发现两种编码番茄红素0一环化酶的基因， CRT[。一B和B。由B基因编码的有色体特异性的番茄红素0一环化酶在番茄花和果实中 特异性表达。 为提高番茄果实中D胡萝h素的含量，本人根据GenBank报道的核酸序列信息设 计特异性引物，通过PCR方法，从微型番茄Micro--Tom核基因组DNA中克隆到了B 基因的编码区，将B基因与植物组成型表达CaMV3,^S启动子融合，构建成双元载体 pLeBZN，导入农杆菌，利用农卡r菌介导的遗传转化方法转化到微型番茄Micro--Tom 中，现通过抗性筛选和PCR鉴定，已经筛选出一些转基因植株。转基因植株的花和成 熟果实中B胡萝h素和番茄红素含量有待于进一步检测，同时，还有许多假定的转基 因番茄有待于进一步的筛选和鉴定。 另一方面，为了利用RNA干扰技术敲除番茄中的B基因以提高番茄果实中番茄红 素的积累，本人从B基因组中克隆了327bp的DNA片段，分别正向和反向插入RNAi 表达载体pKANNIBAL的克隆位点，并进一步构建B基因的双链RNAi表达载体LeRNAiZN 以进行微型番茄的转化，这部分实验正在进行当中。 关键词：番茄红素， B胡萝h素，B基因编码的有色体特异性的番茄红素0一环化酶， 农杆菌介导的遗传转化，转基因微型番茄Micro--Tom 型坷B基国毂遒蠢述鲢毯睦塞墼变量麴墨塞虫耋塑蔓b塞盥塑盛塑盒量 型坷B基国毂遒蠢述鲢毯睦塞墼变量麴墨塞虫耋塑蔓b塞盥塑盛塑盒量 些!蛭墼i Abstract Lycopene and 0 carotene arc two of carotenoids，which play important roles not only in the growth and development of higher plants but also in human health and nutrition．More and more reports suggested the i nvolvement of them in reducing the onset of some chroniC disease include cancers．Tomato fruit and its processed products are the principal dietary sources of lycopene and are also useful for their B—carotene contentS．Therefore，the elevation of carotenoid biosynthesiS in plants， especially in tomato， by genetie manipulatiOn should increase the lycopene and 13一carotene levelS and hence improve the nutritional qua[ity of the crop． Tomato frui ts accumul ate both lycopene and B—carotene．The develoDmentally regulated transcripti on i s the major meehanism that governs their accumulatj on in ripening fruits，in which lycopene B—cyclase，an enzyme that converts 1ycopene to B—carotene．iS a key factor．There are