冷诱导RNA结合蛋白在缺氧复氧损伤中的心肌保护作用研究-内科学(心血管病)专业论文.docxVIP

摘要 摘要 万方数据 万方数据 摘 要 目的: 探索 H9c2 心肌细胞在缺氧/复氧（hypoxia/ reoxygenation, H/R）条件下冷诱 导 RNA 结合蛋白(CIRP)的表达及其在心肌细胞缺氧/复氧损伤中所起的具体作 用。 方法： （1）缺氧复氧的模型（95%N2 和 5%CO2）的建立，采用的是 H9c2 心肌细 胞，在体外培养建成。 （2）检测 CIRP 在缺氧/复氧过程中，mRNA 及蛋白的表达概况，采用的是 RT-PCR 来检测 mRNA 的表达，Western blot 印迹法来检测蛋白的表达，并要着 重注意两者在缺氧/复氧过程中表达最高的时间点，作为后续试验中缺氧复氧时 间。 （3）缺氧复氧处理选择在缺氧 14h 及复氧 2h 两个时间点上进行，实验时 共分为 10 组同时进行，分别为： ①正常对照组； ②H/R 组； ③CIRPsiRNA 处理细胞组； ④CIRPsiRNA 处理细胞+ H/R 组; ⑤阴性干扰处理细胞组； ⑥阴性干扰处理细胞+ H/R 组； ⑦CIRP 过表达质粒处理细胞组； ⑧CIRP 过表达质粒处理细胞+ H/R 组； ⑨空载质粒处理细胞组； ⑩空载质粒处理细胞+ H/R 组. （4）用 western blot 印迹法检测 CIRP 和凋亡蛋白 caspase-3 的表达情况， 流式细胞仪检测各组凋亡状况。 结果： （1）心肌细胞缺氧处理时，RT-PCR 显示 CIRPmRNA 表达两小时有所下降， 之后有明显增加，在 14 小时到达最高。western blot 印迹法显示 CIRP 蛋白表达 II 随着缺氧有明显增加趋势，到 14 小时出现高峰。流式检测表示随着缺氧时间增 加凋亡增加，6 小时和 8 小时达高峰。 （2）在缺氧 14 小时，0~8 小时的复氧时间里，CIRP 在缺氧 14 小时复氧 2h 这个时间表达最高。 （ 3 ） 通 过 外 源 性 转 染 过 表 达 质 粒 使 CIRP 过 表 达 并 缺 氧 复 氧 组 细 胞 caspase-3 表达和凋亡率低于单纯缺氧复氧组，并具有统计学意义 P0.05；转 染 CIRPsiRNA 并缺氧复氧组细胞 caspase-3 蛋白表达量和凋亡率明显高于单纯 缺氧复氧组细胞，并有统计学意义 P0.05。单纯过表达 CIRP 组细胞 caspase-3 蛋白表达低于正常组，有统计学意义 P0.05，凋亡率低于正常组，有统计学意 义 P0.05；单纯干扰细胞 CIRP 表达组 caspase-3 蛋白表达和细胞凋亡率高于正 常组，有统计学意义 P0.05。 结论： （1）H9c2 细胞中 CIRP 正常情况下存在低水平表达。 （2） H9c2 心肌细胞在缺氧/复氧条件下，随着缺氧时间增加冷诱导 RNA 结合蛋白表达逐渐增加，在缺氧 14 小时及复氧 2 小时这两个时间点上，出现表 达高峰。 （3）在缺氧 14 小时及复氧 2 小时这两个时间点上，高表达的 CIRP 能够抑 制 H9c2 心肌细胞的凋亡； （4）在缺氧 14 小时及复氧 2 小时这两个时间点上，如果干扰 CIRP 表达， 则可以促进 H9c2 心肌细胞的凋亡。 （5）过表达 CIRP 可使 H9c2 心肌细胞在正常情况下减轻凋亡。 （6）干扰 CIRP 表达可使 H9c2 心肌细胞在正常情况下增加凋亡。 综上所述：CIRP 在缺氧复氧损伤中确实有心肌细胞保护作用。 关键词：冷诱导 RNA 结合蛋白；缺氧复氧；心肌细胞；调亡 III Ab Abstract ABSTRACT Objective: Reserch on the expression of the cold-induced RNA binding protein and its role in myocardial cell under the hypoxia/reoxygenation condition. Method: （1）Use the H9c2 myocardial cells cultured in vitro to establish the hypoxia/reoxygenation (H/R) model（95% N2 and 5% CO2）. （2）Use RT-PCR and Western blot to detect the expression of the mRNA and protein of CIRP under H/R conditions respectively, and then pick the time points with highest expression which will be used as the H/R