利用FISH和GISH分析四倍体北野豌豆及其近缘种的基因组构成与进化-细胞生物学专业论文.docxVIP

摘要北野豌豆(Vicia 摘要 北野豌豆(Vicia ramuliflora Ohwi)隶属于豆科(Fabaeeae)野豌豆族 (Trib．Viceiae Bronn．)野豌豆属(Vicia Lirm．)sRbgen Vicia亚属、歪头菜组(Sect Oroboidea)，是经济价值较高的植物。关于野豌豆属的分类系统，200多年来， 其属级地位一直保留着，而属下分类等级变动很多。不同学者对北野豌豆的分类 处理意见也有所不同，因此，有必要进行全面而深入的分类学研究。前人从分类 学、细胞地理学、种子蛋白等不同角度对北野豌豆及其近缘种进，亍了较为深入的 研究，但在分子进化及分子细胞遗传学水平上的工作较少。本文运用荧光原位杂 交(FISH)和基目组原位杂交(GISH)方法，分析了四倍体北野豌豆及其近缘种的 染色体分子分化，建立和比较它们的分子核型，初步揭示了四倍体基因组构成和 可能的二倍体亲本，这是传统细胞学和杂交实验方法所无法解决的问题。同时， FISH和GISH结果也为正确处理北野豌豆及其近缘种的分类地位提供了有利依 据。主要结果如下： 一． 对分布在东北的北野豌豆3个二倍体种群18S rDNA、5S rDNA杂交位点 进行比较，发现带岭与横道河子种群rDNA信号数目及在染色体上所处的位置完 全相同，支持其同属一个亚种的分类地位。千山种群与二者不同之处在于I号同 源染色体之一多了一个5S rDNA位点，结合其它资料报道，支持前人把它另立 一个亚种的分类处理。 二． 北野豌豆长白山北坡与西南坡两个居群rDNA位点无差别．且发现低海拔 地区也存在生长良好的四倍体细胞型，同前二者无差异。与低海拔二倍体比较， 四倍体rDNA位点数目是二倍体的两倍，信号在染色体上所处位置与二倍体相对 应。加之背景资料记载野豌豆属植物种间杂交异常困难，初步判定高海拔分布的 四倍体为同源四倍体，带岭或横道河子种群可能是其亲本。 二． 同组近缘种歪头菜二倍体与北野豌豆二倍体相比，I号染色体上多了一列 5S rDNA位点，北野豌豆四倍体在染色体相应位置上也未出现此信号，推断二倍 体歪头菜不是北野豌豆四倍体的直接亲本。而歪头菜四倍体与二倍体的rDNA信 号位点完全吻合，很可能为同源四倍体。四． 号位点完全吻合，很可能为同源四倍体。 四． 异地分布的无萼齿野豌豆比北野豌豆长白山四倍体在II号染色体上多了一 对5S rDNA信号，与千山种群和歪头菜二倍体相应位置的5S rDNA相联系，推 测千山种群在进化过程中可能贡献了这条染色体；或者天目山四倍体本身是个异 源多倍体，它存在歪头菜二倍体的基因组，并且与另一亲本杂交形成四倍体。一 系列推断还有待确证。 牯岭野豌豆II号染色体之一存在一个5S rDNA位点，其余位点分布情况与 天目山种群同。此位点不能排除实验误差所致，若其确实存在，则牯岭野豌豆至 少在这一位点对两亲本来源的基因进行了重组，从rDNA位点上看，千山种群可 能参与了进化， 五． 黑龙江野豌豆rDNA位点分布与北野豌豆各种群有很大差异，尤其V号染 色体长臂末端存在一对18S rDNA位点，说明二者在亲缘关系上较远。 六． 两种rDNA的连锁模式为，18S rDNA和5S rDNA连锁于同一染色体的同 一臂上，18S rDNA大多接近于外侧。 七．以带岭总DNA为探针，对其自身、长白山种群、无萼齿野豌豆、歪头菜二 倍体进行基因组原位杂交(GISH)，结果表明杂交对象基因组可完全被探针标记， 说明它们的基因组组成十分相似，亲缘关系非常近。在今后的工作中可以尝试加 大封阻以提高基因组间的差异。 关键词：北野豌豆，近缘种，基因组构成，18S rDNA基因，5S rDNA基因．荧 光原位杂交(FISH)，基因组原位杂交(GISH) Abstract矿ramuliflora，a Abstract 矿ramuliflora，a specie of Vicia L．，has higher economic value．For 200 years．its status of genus has been reserved，but alterated below this rank．So it is necessary to study thoroughly on taxonomy because of many taxonomists’different opinions．Base on taxonomy，cytogeography and other evidences，previous studies have provided us much valuable information．However,the researches on molecular