山羊促卵泡素（FSH）基因cDNA的克隆、序列分析与表达研究-动物遗传育种与繁殖专业论文.docxVIP

张军强：山羊促卵泡素(FSH)基因eDNA的克隆、序列分析与表达研究山羊促卵泡素(FSH)基因cDNA的 张军强：山羊促卵泡素(FSH)基因eDNA的克隆、序列分析与表达研究 山羊促卵泡素(FSH)基因cDNA的 克隆、序列分析与表达研究 研究生：张军强 导师：丁家桐教授 (扬州大学畜牧兽医学院江苏扬州225009) 摘要 利用RT--PCR技术从山羊脑垂体RNA中成功扩增出促卵泡索(FSH)a和 B亚单位eDNA。山羊FSHa亚单位eDNA的阅读框由363个bp组成，编码由120 个氨基酸组成的多肽，前24个氮基酸为潜在的信号肽序列，成熟肽由96个氨基 酸组成，预测分子量为10．79kDa，其56和82位上存在两个潜在的N～糖基化位 点。B亚单位eDNA的阅读框由390个bp组成，编码由130个氨基酸组成的多肽， 前18个氨基酸为潜在的信号肽序列，成熟肽由111个氨基酸组成，预测分予量为 12．53kDa，其7和24位上存在两个N一糖基化位点。山羊FSH a亚单位与已发表 的绵羊、牛、水牛的氨基酸序列同源性分别为100％、97．5％和983％，山羊FSH p亚单位与已发表的绵羊、牛和猪的氨基酸序列同源性分别为97。7％、93．1％和 93．1％。 将克隆于pGEM-TEasy质粒中的FSHl3亚单位基因片段通过PCR扩增获得去 信号肽的eDNA阅读框，再将此插入到原核表达载体pGEX．6p．1的谷胱甘肽s～ 转移酶(GST)基因的下游，获得重组质粒pGEX．6p．1．FSH B。将此重组质粒导 入大肠杆菌BL21(DE3)，用IPTG进行诱导表达，通过对重组大肠杆菌菌体的超 声波裂解物的SDS—PAGE电泳分析及Western—blot鉴定，结果表明重组菌能满意 表达融合蛋白形式的FSH B，即FSHl3蛋白与谷胱甘肽s一转移酶相连组成的蛋 白质，分子量约为41kDa，与预期大小一致，电泳扫描净灰度达28％。 用粗制的GST—FSHB融合蛋白包涵体作为免疫原免疫雌性ICR小鼠，观察免 疫应答反应及其产生的生物学效应。结果表明，大肠杆菌表达的GST-FSH B融合 蛋白免疫小鼠制备了针对FSHB的特异性多克隆抗体。免疫组小鼠子宫的生长受 至b抑制，子富重与对照组存在显著差异(po．05)。由此表明，针对FSH目的多抗与 小鼠体内FSH发生了免疫中和效应。 本实验研究结果，不仅揭示了山羊FSH的分子结构，而且为山羊FSH基因工 程产品的研制。及开展山羊FSH免疫与应用研究奠定了基础。 关键词：山羊；促卵泡素；基因：免疫 堑型查堂堡主堂垡鲨塞． 堑型查堂堡主堂垡鲨塞． ! Studies of Cloning、sequence analyzing and expressing on goat follicle—stimulating hormone(FSH)gene cDNAs M．S．Candidate：Zhang Junqiang Supervisor：Prof,Ding Jiatong (Animal Science and Veterinary Medicine College，Yang Zhou University翟5009) AB STRACT The cDNAs for goat follicle stimulating hormone(FSH)c‘一and B—subunit were amplified from the anterior pituitary RNA using RT—PCR technique．The open reading frame(ORE)ofthe洳subuniteDNAencoded aprecursorproteinofl20amino acids，of which the nrst 24 amino acids were predicted to be the signal peptide．The mature peptide had a predicated molecular weight of 10．79 kDa and two potential N-linked glycosylation sites at positions 56 and 82．The 13-subunit cDNA encoded a precursor protein of 130 amino acids，ofwhich the first 18 amino acids were predicted to be the signal peptide．The mature peptide had a predicted molecular weight of 1 2．53kDa and two