离子束介导大豆DNA转化普通小麦的转化效果研究-作物遗传育种专业论文.docxVIP

摘 摘 要 本试验研究了离子束介导大豆DNA转化普通小麦当代转化效果和 转化二代遗传特点；采用正交设计，综合考察了影响转化效果的4个 因素；并将SDS和A—PAGE电泳用于检测所获转化后代的高蛋 白质植株。结果表明： 1．单纯的离子注入对不同小麦品种影响不同，对同一品种的各品 质性状影响也不同。离子注入对小麦品质性状有所影响，但幅度不大。 2．转化当代(T，代)小麦各品质性状的平均值与对照无显著差异， 变幅增大，并出现了一定比例的高蛋白植株；T：代开始分离，其蛋白 变幅进一步增大，大量单株退回到正常对照水平，但仍保留有相当比 例的高蛋白植株。 3．在受体、供体、DNA浓度、浸种时间这4个因素中，影响转 化效果的主次顺序为：受体小麦品种、供体大豆品种、浸种时间和 DNA浓度。4个受体小麦品种中，株系豫农92349后代转化率最高， 是优良的受体；4个供体大豆品种中，郑14青豆是较好的供体；在 浸种时间的这4个梯度中，浸种时间为48h时，转化效果最好；4个 DNA浓度的水平分析，浓度为200rtg／ml时转化效果最好。 4．同一受体对不同供体和同一供体不同受体间转化率差异显著。 在供试的16个组合中，筛选了4个优良组合，排序为豫农92349／豫 豆19、豫农92349／郑多枝、豫农92349／郑14青豆、豫麦52／郑14青 豆。 5．SDS电泳分析，获得了15株高蛋白变异株，变异株与对 照间的差异表现在高分子量谷蛋白亚基(HMW--GS)和谱带的着色上。 A—PAGE电泳分析，获得了9株变异株，变异主要在迁移率低的慢带 区即∞区，而且谱带的染色较对照加深。在谷蛋白上有变异的植株在 醇溶蛋白上与对照并没有差异，而在醇溶蛋白上的变异株在谷蛋白上 与对照也没有差异。 与对照也没有差异。 关键词：小麦；离子注入；大豆DNA；介导转基因；转化效果 1文献综述1．1小麦转基因技术的研究进展 1文献综述 1．1小麦转基因技术的研究进展 采用远缘杂交技术将小麦野生近缘物种中的有益外源基因导入 小麦栽培品种，对其抗性、品质、产量的提高发挥了重要作用。但 由于双亲亲缘关系较远造成杂交不结实、杂种不育、杂种后代长期 分离、预见性差，是该技术在小麦遗传改良上的应用受到一定限制“1。 随着分子生物学的飞速发展、基因克隆技术和重组DNA技术的建 立与完善，利用植物基因工程方法直接在分子水平上开展植物的品质 育种已成为可能。植物转基因技术被证明是进行外源基因定向转移独 特而有力的手段，一定程度上补充或改进了传统的育种方法。通过植 物遗传转化技术，可以按照需要，将含有遗传信息的DNA片断即目的 基因进行人工重组，在离体条件下转入宿主细胞进行复制、表达，定 向改造植物，从而打破基因流的界限，大大缩短育种周期。小麦作为 世界第一大粮食作物，是转基因操作的热点，也是最先应用于染色体 遗传学研究的植物材料，然而它却是最后一个获得转化成功的重要禾 谷类粮食作物瞳1。小麦属于六倍体作物，基因组大而复杂可能是转化 困难的原因之一，其次是小麦属于典型的单子叶和严格的自花授粉植 物，其细胞再生分化能力弱，遗传转化过程中存在着DNA导入频率低且 转化后再生能力不高等问题曙1。 1992年Vasil得到第一例转基因小麦H1以来，许多研究者利用 不同方法将多种基因导入了小麦，获得了一批转基因植株(表1)。 小麦转基因技术从总体上分两大类：(一)裸露DNA的直接转化，(二) 农杆菌介导的转化。 裸露DNA的直接转化技术包括：基因枪法、显微注射法、激光 表1 表1 小麦遗传转化研究状况一览表 4 微束穿刺法、电激穿孔法、PEG介导法、脂质体介导法等。显微注射 微束穿刺法、电激穿孔法、PEG介导法、脂质体介导法等。显微注射 法、激光微束穿刺法、电激穿孔法、PEG介导法等转换方法，需要以 原生质体为受体，而原生质体的培养对基因型依赖性大，再生非常 困难，且转基因植株育性较低。由于这些困难使以原生质体为受体 的直接法在小麦基因转化中的使用受到很大限制。基因枪法避开了 原生质体培养和再生的困难、受体来源广泛(包括胚性愈伤组织、 未成熟胚、盾片和花粉等)，不受基因型的限制，但是转化率不高且 价格昂贵，使其应用受到限制。农杆菌介导法自1983年问世以来， 因其转化率高，遗传稳定且方法简单受到人们的极大关注。目前农 杆菌介导法是最成熟最有效的转化方法之一，已成为大多数植物基 因转化的首选方法。但农杆菌对大部分单子叶植物尤其是禾谷类作 物不敏感，在小麦转化上目前仍受基因型和宿主范围限制，对组织 培养技术依赖性强及转化率不高等缺点。因此探索更为有效的转化 系统一直是各国科学家追求的目标。 1．2小麦诱变育种 植物诱变育种是人为利用物理诱变因素和化学诱变剂诱发植物 遗传变异，在较短时间内获得有利用价值的