辣椒恢复基因分子标记的筛选及在染色体上的定位-微生物学专业论文.docxVIP

辣椒恢复基戡分子标记的筛选驶在染色馋卜的定缱 辣椒恢复基戡分子标记的筛选驶在染色馋卜的定缱 摘要 摘 要 目前辣(甜)椒利用不育系，恢复系，保持系三系配套方法生产一代杂种，因其 纯度高，生产成本低，已成为辣(甜)椒杂种优势利用的重要途径。在利用CMS 生产杂交种中，新的方法一分子标记辅助育种技术显示出巨大的潜力。本研究针 对制钟过程中，恢复系选育周期长，选育效率低及恢复源少的现状，以不育系与恢 复系为材料，应用BSA法，寻找恢复基因的标记位点。为缩短恢复系选育周期， 分离克隆恢复基因，并为将辣椒恢复基因转入甜椒，人工创造甜椒相应的恢复系 奠定基础。 通过上述方法得到如下结果： 1、本研究采用336个lObp随机引物分析了辣椒不育系与恢复系基因组DNA池问 的多态性，有37个引物的扩增产物在不育系和恢复系材料间呈多态性，经进一 步的重复实验证明，只有引物$418能够产生稳定的多态性。其大小为1500bp 左右。 以$418为引物，对不育系和恢复系进行单株检测。在恢复系基因组DNA中 均得到一条1500bp左右的特有标记，并能稳定出现。 将此特异片段回收，制备探针。进一步的荧光原位杂交分析显示：$418。 在恢复系6条染色体上显示清楚的杂交信号，在不育系染色体中无杂交信号。据 此认为，这一RAPD标记为低拷贝序列，可能与辣椒恢复基因相关。测序及转成 SCAR标记工作正在进行中。 2、本研究对RAPD技术的实验程序进行了研究，并对在应用RAPD技术中存在的 一些问题和策略进行了讨论。 关键字：辣椒，RAPD分子标记，恢复基因，荧光原位杂交定位 辣敷恢复基鼹分子标记抟镑选技在染色体i的定位Abstract 辣敷恢复基鼹分子标记抟镑选技在染色体i的定位 Abstract Hybrid seed production based cytoplasmic male sterility play important role in utilization of heterosis in pepper because it an achieve high purity and low cost． However,during this project，breeders found that restorer gene 1 imited and its selection period long in pepper．To exploit CMS in hybrid seed production of p印per,new strategies must be used．Marker assisted selection(MAS)is showing great promise in facilitating conventional breeding．So in this paper,．Bulked segregant analysis(BSA)was applied identify molecular marker linked to gene using line and its male sterility line．Molecular marker closed linked gene will shorten the selection period of restorer line and improve selection efficiency．In the future，hot pepper restorer gene will be transferred into sweet pepper and creased sweet pepper man—made restorer lines．Moreover,it will facilitate the breeding of new lines used in pepper CMS system．The results follows： 1．There are 336 decamer primers with arbitrary sequences were screened for polymorase chain reaction amplification．Among them，37 primers were selected markers．The result of further studies indicated that the polymophism between the restorer line and the male sterility line could be detected RAPD marker S4 18㈣ that Was linke