影响血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验结果的常见因素及相应对策.docVIP

影响血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验结果的常见因素及相应对策 ［ ］醋酸纤维薄膜电泳被广泛应用于临床 检验及医学实验教学中，但影响实验结果因素很多。 针对实验过程中容易出现各种影响因素进行分析探讨 并提出具体改进措施，以便得到理想的图谱，为临床 检验及实验教学提供分析依据。 ［关键词］醋酸纤维薄膜；电泳；影响因素；对策 ［ ］R446.ll ［ ］B ［ ］ 1673-7210 (2011) 12 (a) -162-02 The comm on factors and corresp on ding measures of affecting the experiment results of the cellulose acetate membrane electrophoresis of serum protein HE zhiying Medical College of Yanan University, Shaanxi Province, Yan^n 716000, China ［Abstract］ Cellulose acetate film electrophoresis is widely used in clin ical exami nation and medical experimental teaching, but many factors affect the results. The analysis discussion is directed to the various factors in the experiment and concrete measures for improvement are put forward in order to obtain the ideal map for the an alysis of the clin ical exami nation and laboratory teachi ng. [Key words] Cellulose acetate membrane; Electrophoresis; In flue ncing factors; Coun termeasure 醋酸纤维薄膜电泳是以醋酸纤维薄膜作支持物的 一种区带电泳技术，因其有快速省时、分辨能力强、 操作简单、成本低廉、透明后利于扫描定量及长期保 持等优点,被广泛应用于血浆蛋白、脂蛋白、糖蛋白、 核酸及其他生物大分子的分析检测，已成为医学和临 床检验的常规技术，血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验 也成为了生物化学实验课程必开的基础实验项目之一。 但该实验影响因素很多，每个环节的失误都会对实验 结果产生影响而得不到理想的图谱，并且还造成很大 浪费。笔者结合多年的实验教学经验对影响本实验结 果的常见因素进行分析探讨，并提出了相应的解决对 策。现报道如下 1电泳前准备的影响因素 1.1醋酸纤维薄膜的因素 1.1.1醋酸纤维薄膜的选择 醋酸纤维薄膜如果厚 度不一、粗面细孔不均、脆性不一，在电泳时会出现 区带不均匀、白色斑点处蛋白质不泳动而影响图谱的 效果⑴。对策①购买知名度相对高的正规厂家生产 的产品；②将干膜片漂浮于电极缓冲液表面，如漂浮 20 s左右时，膜片出现白斑点或条纹，应舍去不用［2］。 1.1.2醋酸纤维薄膜的浸泡由于醋酸纤维薄膜亲 1.1.2 醋酸纤维薄膜的浸泡由于醋酸纤维薄膜亲 水性比较低，浸泡时间过短，不能保证膜片上有一定 量的缓冲液，难以使其恢复原来多孔的网状结构，所 以浸泡时间不少于30 mine浸泡时用银子将纤维薄膜 条粗面向下平稳放入缓冲液中，使其自然湿润沉下液 面或用手轻摇装液外盒，不要用银子、玻棒等器材按 压纤维素薄膜沉下液面，也不要同时将多条纤维素薄 膜一起放进缓冲液盒。 1.2标本的因素 1.2.1血清标本的新鲜度不新鲜血清标本蛋白质 电泳图谱a 2与B之间可能会多出现一条粗而染色均 匀的区带，也可能会出现电泳图谱区带不清晰，比较 离散，甚至有拖尾现象⑴。有研究证明，在2?8°C冰 箱保存血清标本，第1天与第2天标本中各蛋白质组 分百分比变化无统计学意义，从第3天开始，标本中 白蛋白百分比下降，a—球蛋白、a 2-球蛋白和球 蛋白百分比上升均有统计学意义⑶。因此，必须使用 新鲜的血清，如新采取血清标本不是马上用，则必须 放4°C冰箱贮存保鲜，但时间最多不能超过48h。 1.2.2溶血标本 溶血标本中白蛋白降低，a 2-球 蛋白、球蛋白升高。严重溶血时可见a 2、B球蛋 白区带重叠，区带百分比增加［4］,因此应采用清亮无 溶血的血清标本。 1.2.3点样标本的替代有文献报道，在实验教学 中用鸡蛋白（鸡蛋清缓冲液9）代替血清作为点 样样品，加样量约3 可取得