拉西地平、氨氯地平对人脐静脉内皮细胞间粘附分子-1（ICAM-1）表达的影响-心血管专业论文.docxVIP

原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独 立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研 究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完 全意识到本声明的法律责任由本人承担。 论文作者签名： 封垣呈 日期：z磁：比：理 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学 校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论 文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分 内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段 保存论文和汇编本学位论文。 (保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名：爿逝主导师签名：缨 Et 期：∥ 东大学硕士学位论文中文摘要 东大学硕士学位论文 中文摘要 拉西地平、氨氯地平对人脐静脉内皮细胞间粘 附分子一1(ICAM-1)表达的影响 山东大学医学院 心血管专业 硕士研究生 刘海宁 导师 张兴华教授 背景在发达和发展中国家，动脉粥样硬化是导致冠心病、脑血管病和外周血管 疾病发病和死亡的主要原因。对动脉粥样硬化发病机制的研究己从危险因素的流行病 学调查发展到了细胞和分子生物学水平。过去十几年积累的大量证据证明，动脉粥样 硬化是血管壁的炎性疾病，一组特殊的分子即细胞粘附分子介导了血管壁的炎症反 应。导致动脉粥样硬化的各种危险因素如高胆固醇血症、高血压、糖尿病、吸烟等均 可刺激血管内皮细胞表达各种粘附分子，介导血液中自细胞，尤其是单核细胞在血管 内皮细胞的粘附，这是动脉粥样硬化形成最早、最关键的一步。 细胞间粘附分子一1(ICAM一1)属免疫球蛋白超家族，主要表达于血管内皮细胞 表面，通过自细胞表面的配体，即03整和素(CD-I／CDl8)与白细胞相瓦作用，介导 自细胞，尤其是单核细胞在血管内皮细胞表面的粘附，粘附的单核细胞可通过内皮细 胞间隙进八到内皮下，通过其表面的“清道夫”受体吞噬脂质，形成泡沫细胞，形成 了动脉粥样硬化的最早期病变一脂肪条纹。 研究发现第三代的二氢吡啶类钙通道阻滞剂拉西地平和氨氯地平除具有良好的 降压作用外，还具有良好的抗动脉粥样硬化作用。根据目前的研究，认为拉西地平和 山东大学硕士学位沦文氨氯地平抗动脉粥样硬化作用机制主要在以下几个方面：(I)具有抗氧化特性；(2) 山东大学硕士学位沦文 氨氯地平抗动脉粥样硬化作用机制主要在以下几个方面：(I)具有抗氧化特性；(2) 抑制血管平滑肌细胞膜的重塑；(3)抑制血销’平滑肌细胞的增生和迁移：(4)抑制细 胞斟f诱导的内皮细胞凋产：(5)调节血管细胞举区l的表达和细胞外摹质的形成。但 这两种二氢吡啶类钙通道阻滞剂能否抑制细胞粘附分了的表达，在国内尚无这方面的 报导。本课题将对此进行了研究。 I：I的 分别观察第三代二氢吡啶类钙通道阻滞剂拉西地平、氨氯地平对人脐静脉 内皮细胞问粘附分子-1(ICAM-1)表达的影响，以探讨二氢吡啶类钙通道阻滞剂抗动 脉粥样硬化的作用机制。 方法 1人脐静脉内皮细胞株．H8(HUVECs．H8)的传代培养：细胞的复苏成功 后，在37 9C、5％C02的条件下，用含20％胎牛血清(FBS)DMEM培养纂进行传代 培养，待细胞长成致密单层后即可进行试验。2分别将拉西地平和氨氯地平原料药融 于乙腈中，拉西地平的浓度为2,63×10～mmol／ml，氨氯地平的浓度为2．63× 10．3mmollml。取拉西地平、氮氯地平溶液各20mI、60ml、120ml，分别加入到lml 的LDL(1．19／m1)中，充分混匀。然后分别取200ul的LDL加入到培养的HUVECs 中(内含2ml含20％FBS的DMEM培养液)，37C、5％C02温箱中培养45分钟：再 分别加入TNF-a(浓度为2ng／m1)于培养的HUVECs中，37C、5％C02温箱中培养6 小时。3流式细胞技术测定ICAM．1的蛋白表达。4逆转录．多聚酶链反应(RT-PCR) 测定ICAM．1 mRNA的表达水平。 结果 (I)流式细胞检测结果显示，TNF—a可显著诱导HUVEC ICAM—l蛋白表达 的增加，其平均荧光强度为129．81±5．77(n=3)。不同浓度的拉西地平(20ul、60ul、 120u1)对HUVECs ICAM—l蛋白表达的平均荧光强度分别为108．77+6．31、81．50+ 4．65、65．54+3．27(n=3)(F=38．06，P(0．01)：不同浓度的氨氯地平(20ul、60u1、 东大学硕十学位论文120u1)对HUVECs 东大学硕十学位论文 120u1)对HUV