蛋白质检测与相互作用的毛细管电泳新方法研究.pdfVIP

目录 3．2．1仪器设备及主要配件…………………………………………………………22 3．2．2材料与主要试剂…………………………………………………………………22 3．2．3主要溶液及样品配制…………………………………………………………22 3．3结果与讨论……………………………………………………………………．23 3．3．1平台峰的获得…………………………………………………………………．23 3．3．2标准曲线的建立………………………………………………………………24 3．3．3 CBZ与HSA的相互作用……………………………………………………24 3．4本章小结…………………………………………………………………………28 第四章DNA适配体与蛋白质结合作用的CE—FA分析…………………………29 4．1引言………………………………………………………………………………29 4．2材料与方法……………………………………………………………………．．30 4．2．1仪器设备及主要配件…………………………………………………………30 4．2．2材料与试剂……………………………………………………………………30 4．2．3溶液及样品配制………………………………………………………………．30 4．2．4实验方法………………………………………………………………………30 4．3结果与讨论………………………………………………………………………．32 4．3．1电泳条件对凝血酶．适配体F29．mer结合的影响…………………………．32 4．3．2 CE．FA法测定适配体F29．mer与凝血酶的亲和力…………………………。38 4．3．2．1适配体F．29mer标准曲线的建立…………………………………………。38 4．3．2．3以适配体或复合物峰高变化测定F29-mer与凝血酶解离常数…………．．41 4．3．2．4单点法测定适配体F29．mer与凝血酶的解离常数………………………．．42 4．4本章小结…………………………………………………………………………43 个人简历………………………………………………………………………………64 致谢……………………………………………………………………………………………………………．65 H 缩略词表 III 中文摘要 中文摘要 高灵敏蛋白质检测方法及相互作用研究对疾病的诊治具有重要意义，同时也 是蛋白质组学得以迅速发展的巨大动力。近年来，针对功能蛋白的高灵敏度分析 检测新方法研究，一直是生命科学研究中蛋白质分析领域的研究热点。本论文即 开展了基于毛细管电泳(CE)技术的相关蛋白质间接检测新方法及与小分子药 物或单链DNA适配体的结合作用研究，全文共分为四章。 第一章综述了蛋白质的高灵敏度检测与识别技术概况，重点总结了近年来 CE技术在蛋白质分离分析、相互作用中的相关进展。 第二章中，我们首次将具有高效分离能力的CE方法和BCA法结合起来，建 立了一种间接检测蛋白质的新方法。以伊环糊精为包合添加剂，有效地实现了 快速、完全显色的目的，实现了在低波长处对转铁蛋白、蓖麻毒素等功能蛋白的 快速、高灵敏度检测的目的。本方法亦成功应用于第一届蓖麻毒素国际实验室间 比对测试(2009年)蓖麻毒素蛋白样品的检测中。所测定的样品中蓖麻毒素的含 量结果与真值相比，偏差介于0．4．6．8％之间，说明了我们在CE中以BCA．Cu+复合 物浓度的定量间接指代蛋白质定量之思路的正确性。 第三章通过CE．前沿分析法(CE．FA)研究碱性药物CBZ与HSA间相互作 用，注重选择R值处于较窄范围的不同浓度的CBZ．HSA体系进行测定，从而使 线性方程与非线性方程所得到的结合参数符合较好，方便地求出了该体系的结合 常数和结合比，该弱相互作用体系的解离常数(IQ)值为7．09×10～M，CBZ与 HSA近似为l：1结合，CBZ结合到蛋白上的结合百分数介于15．8．22．4％之间。 第四章使用CE．FA法